TAT-E4orf4 融合蛋白对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

殷洁烽 徐统球 张 喆 孙元水

胃癌是消化系统最常见的肿瘤之一，其发生与幽门螺杆菌感染和长期摄入腌制食品有关[1]。早期胃癌的治疗方法主要有内镜手术、腹腔镜手术、开放手术和综合治疗。对于未发生转移的胃癌患者，日本JGCA 指南推荐实施根治性手术[2]。然而我国早期胃癌发现率低，常错过最佳手术时机，而仅能使用卡培他滨+顺铂/奥沙利铂等药物行姑息性治疗[3]。化疗药物不仅价格昂贵，还可能导致恶心、呕吐、食欲减退或骨髓增生抑制等不良反应。腺病毒早期区4 第4编码蛋白（adenovirus early region 4 open reading frame 4 protein，E4orf4 protein）是一种新型的细胞毒因子，不仅参与腺病毒的基因剪切和表达等过程，而且能特异性杀伤癌细胞[4]。Brestovitsky 等[5]以pcDNAE4orf4 的表达载体诱导肿瘤细胞后，死亡率达到80%～90%。为研究E4orf4 对正常细胞的影响，Robert 等[6]以E4orf4 处理人来源肿瘤细胞和原代细胞，发现E4orf4 仅对肿瘤细胞具有杀伤作用，而对正常细胞作用影响很小。E4orf4 蛋白穿透细胞膜进入细胞内是E4orf4 发挥杀伤作用的前提，但是部分E4orf4 无法穿透细胞膜。转导肽能通过内吞方式进入细胞内，而且无细胞毒性[7]。本研究通过基因工程技术构建pET28-his-TAT-E4orf4 原核表达载体，研究TATE4orf4 融合蛋白对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。

1 实验材料

1.2 试 剂 胰蛋白酶（批号90305）和RIMP 1640培养基（批号42401042）购自Invitrogen 公司；胎牛血清（批号10091148）购自复蒙公司。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）（批号sc-7272）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（Caspase-9）（批号sc-73548）、酪氨酸激酶Src（Sarcoma，Src）（批号sc-166860）、细胞外调节蛋白激酶（Extracellular Regulated Protein Kinases，ERK）（批号sc-271269）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（Phospho-Extracellular Regulated Protein Kinases，p-ERK）（批号sc-7383）、蛋白激酶B（Protein Kinase，BPKB 或AKT）（批号……