新疆艾比湖野鸟H1N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

李培东，刘庆庆，肖陈城*，陈创夫*,王 丹，依再提古丽·热依木江，王一帆，朱 雅，王 勇，李亚玲

(1.石河子大学 动物科技学院，新疆 石河子 832000；2.第八师玛纳斯河湿地自然保护区管理站，新疆石河子 832000)

禽流感(avian influenza,AI)又称欧洲鸡瘟，属于正黏病毒科A型流感病毒属，于1878年(意大利)初次报道[1]。禽流感病毒(AIV)根据其表面蛋白的抗原性已鉴定出16种HA亚型和9种NA亚型，除蝙蝠起源的流感样病毒H17N10亚型和H18N11亚型外，所有的AIV亚型最初都是在禽类宿主中分离出来的[2]。世界上第1次分离得到AIV是在1901年，而在1955年才确定AIV与人类以及哺乳动物流感病毒之间存在着关联，在1970年左右发现水禽是AIV的基因库[3]。自AI被报道以来，世界上许多国家和地区都陆续发生了AI的疫情，给当地的养禽业带来了巨大的经济损失，甚至对人类健康也造成了一定的威胁。

本研究对2017年采集自新疆艾比湖自然保护区野鸟的粪便棉拭子进行了AIV的分离与鉴定，从其中一个棉拭子样品中分离到了1株野鸟源的H1N2亚型AIV，并对其进行了全基因组的序列分析，旨在调查野鸟中存在的AIV，为AI的防制提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂总RNA急速抽提试剂盒购自上海飞捷生物技术有限公司；普通琼脂糖DNA回收试剂盒、2×Taq PCR MasterMix购自天根生化科技(北京)有限公司；pMDTM19-T Vector Cloning Kit、反转录酶(SMART MMLV Reverse Transcriptase)、dNTP、Permix TaqTM、DNA Marker购自TaKaRa。

1.2 病毒的分离取2017年采集自新疆艾比湖自然保护区野鸟的粪便棉拭子100 μL，以注射器注射至9日龄鸡胚的绒毛尿囊腔；接种后每日观察鸡胚死亡情况，48 h后收取尿囊液,将收取的尿囊液进行血凝试验初步鉴定。……