刺参精子冷冻保存方法研究

赵谭军，尹文露，邹炀，刘丽，宋坚，常亚青，湛垚垚

(大连海洋大学 农业农村部北方海水增养殖重点实验室，辽宁 大连 116023)

精子冷冻保存技术是动物种质资源保存的重要技术手段，也是目前畜牧业和渔业中种质保存及提供育种基础材料的重要途径[1-2]。水产动物的精子冷冻保存技术与方法的研究最早始于20世纪50年代，英国学者Blaxter[3]首次探讨了大西洋鲱Clupeaharengus精巢(testis)的冷冻保存技术与方法，随后，精子冷冻保存技术与方法的研究在其他水产生物(尤其是水产经济物种)中陆续开展起来。目前，水产经济动物中精子冷冻技术与方法研究开展得相对广泛、体系相对成熟的种类主要有鱼类[4-7]、贝类[8-10]和甲壳类[11-15]，而关于棘皮动物精子冷冻方法的研究则相对滞后。关于海胆类精子冷冻保存方法的研究见于中间球海胆Strongylocentrotusintermediushe和新西兰巨海胆Evechinuschloroticus[16-17]，这两种海胆精子的冷冻保存液均由过滤海水和不同终体积分数的冷冻保存剂二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)配制；而关于棘皮动物中经济价值较高的海参类精子冷冻方法的研究，仅见Shao等[18]的报道，此报道中，刺参Apostichopusjaponicus精子的冷冻保存液以蒸馏水为溶剂，加以一定质量的NaCl、KCl和CaCl2等5种盐类和终体积分数为15%的DMSO配制而成，不同降温方式为：先将聚乙烯网冷冻30 min，后在距离液氮6 cm处的聚乙烯网上放置0.5 mL的聚乙烯管(内含冷冻保存的精子与冷冻保存液)平衡15 min，然后直接投入液氮再转移到容器中，对刺参精子仅进行了1 h冷冻保存，结果显示，冷冻1 h后复苏的刺参精子寿命仅为1 200 s，由于冷冻时间过短且复苏后精子寿命较短，因此，该研究所提供的方法并不具备长期保存刺参精子及在生产实践中应用的潜力。……