HER2靶向载HSV-TK基因纳米泡诱导胃癌细胞凋亡的体外研究

辛莹，周厚妊，张月，刘慧，黄驰，刘治军*

1.中国医科大学附属盛京医院超声科，辽宁沈阳 110004；2.沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016；*通讯作者 刘治军liuzj1@sj-hospital.org

纳米泡作为肿瘤诊疗载体是近年研究热点，可以特异性地靶向识别肿瘤部位，在超声介导纳米泡破坏（ultrasound-targeted nanobubble destruction，UTND）技术下使纳米泡破裂，释放携带的基因，实现肿瘤细胞的靶向治疗[1-3]。然而，外源性基因进入细胞后会被核酸酶裂解，从而丧失功效。本课题组前期研究发现，胍丁胺（agmatine，AGM）-N,N-半胱氨酸双丙烯酰胺（N,N′-cystamine bisacrylamide，CBA）与基因凝聚得到的基因载体复合物具有较高的细胞转染率及良好的核定位效应[4-5]。HER2靶向载单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus-thymidine kinase，HSV-TK）基因/AGM-CBA的全氟己烷纳米泡（targeted HER2 AGM-CBA andHSV-TKgene-loaded perfluorohexane nanobubble，tHAHT NB）作为HSV-TK基因/AGM-CBA的载体，通过生物素-亲和素法与HER2抗体Affibody连接，并包载具备相变能力的全氟己烷。本研究以人HER2阳性人胃癌细胞NCI-N87细胞株及HER2阴性人胃癌细胞MGC803细胞株作为材料，探讨tHAHT NB的体外寻靶能力及核定位效应，以及联合UTND技术抑制NCI-N87细胞生长活性和诱导其凋亡的作用。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

1.1.1 试剂 二棕榈酰磷脂酰胆碱（1,2-dipalmitoyl-snglycero-3-phosphocholine，DPPC）、生物素化聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（ 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000]，Biotin-DSPE-PEG 2000）（西安瑞禧生物科技有限公司）；全氟己烷（perfluorohexane，PFH，上海氟科技）；生物素化的抗HER2 Affibody（Abcam）；单纯疱疹病毒胸腺素激酶（HSV-TK）基因（Gama gene）；胆固醇（CH）及更昔洛韦（Sigma）；NCI-N87细胞株、MGC803细胞株（中国科学院细胞库）；Annexin V、FITC凋亡检测试剂盒（东仁化学科技有限公司）；MTT（大连美仑生物科技有限公司）。

1.1.2 仪器 聚碳酸酯膜挤出器（LiposoFast，AVESTIN）；RE-5203旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；低功率聚焦超声实验装置（重庆医科大学超声影像学研究所）；……