长链非编码RNA RPPH1靶向miR-143-3p在非小细胞肺癌中的作用机制

薛国亮，张 聪，郑桂丽，王 俊

肺癌是常见的恶性肿瘤之一，约占癌症总死亡的18.4%[1]。非小细胞肺癌（non-small cell lunch cancer，NSCLC）是肺癌中最常见的病理类型。虽然近年来肺癌的诊疗技术有所发展，但是5 年生存率仍然不高[2]。长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA）是一类没有开放阅读框的序列高度保守且不编码蛋白的类信使RNA转录本[3]。既往研究显示，LncRNA 通过调控微RNA（microRNA，miRNA）参与癌症的发生和发展[4-5]。核糖核酸酶P RNA 组分H1（ribonuclease P RNA component H1，RPPH1）是新发现的lncRNA，在细胞生长、分化和凋亡中发挥重要作用[6]，与中枢神经系统损伤[7]、糖尿病肾病[8]和肿瘤[9]等疾病有关。RPPH1 在人体组织中广泛表达，可参与结直肠癌[9]、乳腺癌[10]、白血病[11]和食管鳞癌[12]等的进展。既往少有研究报道RPPH1 在肺癌中的作用及其机制。miR-143-3p 在NSCLC 中表达下调，能够抑制癌细胞的增殖、侵袭和迁移[13]。本研究分析RPPH1 通过miR-143-3p 对NSCLC 细胞的增殖和凋亡的影响，旨在探讨RPPH1 在NSCLC 发生和发展中的作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 细胞、试剂及仪器

NSCLC 细 胞Calu-3 和肺腺 癌A549 细 胞以及正常人支气管内皮细胞HBE 均购自上海复祥生物科技有限公司。RPMI 1640 培养液和胎牛血清购自上海语纯生物科技有限公司，LipofectAMINETM2000 试剂购自美国Sigma 公司。特异性针对RPPH1 的shRNA（shRPPH1）和阴性对照（negative control，NC）shRNA（shNC）、miR-143-3p-抑制子（inhibitor）、miR-143-3p-模拟物（mimics）以及携带有RPPH1 的重组质粒pcDNA3.1-RPPH1 均购自山东维真生物科技有限公司。双荧光素酶报告基因检测试剂盒、反转录试剂盒、2×SYBR Green PCR Mastermix 试剂盒、BCA 蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE 凝胶快速制备试剂盒均购自上海联迈生物工程有限公司。凋亡检测试剂盒购自上海语纯生物科技有限公司。引物均由广州伯信生物科技有限公司设计并提供。……