中国优势基因型弓形虫Wh3株诱导人单核巨噬细胞THP-1偏移极化的研究

张芳芳，王 聪，罗庆礼，沈继龙

刚地弓形虫（toxoplasma gondii，T.gondii）是一种全球广泛传播的机会致病性原虫，专性寄生在有核细胞内，引起人畜共患寄生虫病。世界各地分离的弓形虫株基因型具有丰富的遗传多态性和地域差异，流行于欧洲和北美的主要有Ⅰ型（ToxoDB＃10）、Ⅱ型（ToxoDB＃1）和Ⅲ型（ToxoDB＃2）三种基因型，均包含多个虫株；流行于中国的弓形虫株优势基因型为 Chinese 1型（ToxoDB＃9），其中的 TgCtWh3株（以下简称Wh3株），毒力介于强毒的RH株（属于Ⅰ型）和弱毒的ME49株（属于Ⅱ型）之间，且同时具有Ⅰ型虫株的棒状体蛋白激酶ROP16和Ⅱ型虫株的致密颗粒蛋白GRA15。ROP16驱动巨噬细胞极化为旁路途径活化的巨噬细胞（M2）；而GRA15诱导巨噬细胞极化为经典途径活化的巨噬细胞（M1）。虽然 Wh3株同时具有 ROP16和GRA15，但其感染人巨噬细胞后，诱导其分化偏移M1或M2，至今鲜有报道。该文采用Wh3株、RH株和ME49株分别感染人单核巨噬细胞THP-1，了解Wh3株感染后巨噬细胞的分化偏移情况，为深入探讨中国优势基因型弓形虫株致病性和免疫性，具有重要的理论和实际意义。

1 材料与方法

1.1 弓形虫株和细胞株 弓形虫Wh3株、RH株由病原生物学安徽省重点实验室液氮保种，复苏、腹腔接种5～6周龄昆明小鼠传代；ME49株由含包囊的小鼠脑组织，无菌匀浆经口灌胃保种、传代。人单核巨噬细胞THP-1，购自中国科学院上海细胞库，病原生物学安徽省重点实验室液氮保种、传代。

1.2 主要试剂 FBS（加拿大 Wistent公司）；DMEM培养基、BCA试剂盒、RIPA细胞裂解液（上海碧云天公司）；PMA（美国 Sigma公司）；TRIzol（美国Invitrogen公司）；硝酸纤维膜（美国 Billerica公司）；兔抗人Arginase-1、兔抗人iNOS抗体和山羊抗兔IgG H＆L（HRP）（美国Abcam公司）、内参小鼠抗人β-actin和山羊抗小鼠IgG酶标记抗体（武汉Proteintech公司）；……