多肽301 LARSLKT307抑制心肌分化的细胞实验研究

许 耿，朱金改，喻博识，韩树萍，顾海涛，余章斌

先天性心脏病（congenital heart disease，CHD）由各种因素导致的胚胎时期心脏和血管发育障碍，造成心脏形态、功能及病理生理异常。心脏发育是一个时空调控的过程，包括对基因表达和信号通路的精确控制，如Notch信号通路，以及一系列重要的形态变化，而心肌分化是心脏发育的一个重要组成部分，心肌分化的异常往往是导致CHD发生的关键。多肽LARSLKT是从法洛四联症流产胎儿心肌组织中发现的一条生物学活性肽。前期的研究揭示该多肽可以抑制斑马鱼的心脏发育，导致斑马鱼胚胎期心脏的发育及功能异常，但其在细胞水平抑制心肌分化的影响及机制尚无报道。P19细胞是来源于小鼠畸胎瘤中的多功能干细胞，具有自我复制能力和分化潜能，是研究胚胎期心肌分化的良好的细胞模型。因此，该研究拟在P19细胞水平检测多肽LARSLKT对心肌细胞分化的影响，并初步探究其发挥功能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与主要仪器 TRIzol（美国Invitrogen公司）；逆转录试剂盒、定量 PCR试剂盒、SYBR Green Master Mix（日本TaKaRa公司）；二甲基亚砜（DMSO，美国 Sigma公司）；PBS、α-MEM培养基、FBS胎牛血清、青霉素-链霉素（美国Gibco公司）；Dapi（4，6-二氨基-2-苯基吲哚，Sigma）；0.25%胰蛋白酶（美国 Servicebio公司）；Real-time PCR仪（型号：ViiA7，美国UVP公司）；恒温培养箱（上海茸研仪器公司）；紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；兔抗人 cTnT和GATA4抗体（武汉三鹰公司）；羊抗兔IgG（英国Abcam公司）。

1.1.2 细胞 P19细胞购自美国典型培养物保藏中心。

1.1.3 多肽 多肽LARSLKT、乱序肽ALKTLRS和FITC标记的多肽FITC-LARSLKT均委托上海科肽公司合成。

1.2 方法

1.2.1 P19细……