芍药苷-6′-O-苯磺酸酯对高胰岛素诱导足细胞功能损伤的影响

黄琼芳，赵天娇，苏扬妮，黄 琼，魏 伟

糖尿病肾病（diabetic nephripathy，DN）是糖尿病的常见并发症，其发病机制十分复杂。高胰岛素血症（hyperinsulinism，HINS）是DN的主要临床表现，能够促进DN的发生和发展，加重肾损伤。足细胞是肾小球高度分化的固有细胞，是维持肾小球滤过屏障功能正常的主要细胞。DN长时期的高胰岛素环境能够诱导足细胞损伤和凋亡，促进肾小球滤过屏障的破坏和组织学变化，包括肾小球系膜扩张、肾小球间质纤维化和肾小球硬化等。

白芍总苷（total glucosides of paeony，TGP）主要成分为芍药苷（paeoniflorin，Pae）。据报道，TGP能够延缓 DN的恶化。芍药苷-6′-O-苯磺酸酯（phenylsulfonylpaeoniflorin，CP-25）是 TGP的结构修饰产物，其抗炎免疫调节能力和生物利用度更优于Pae。但CP-25对DN的研究尚无报道。该研究拟以永生化小鼠足细胞为对象，探讨CP-25对高胰岛素诱导的足细胞功能的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 CCK-8试剂盒（日本同仁化学公司）；8μm Transwell小室（美国 Corning公司）；GOD-POD试剂盒（上海贝博有限公司）；胰岛素（Sigma公司）；β-actin（北京中杉金桥有限公司）；兔抗Nephrin蛋白多克隆抗体（Thermo Scientifi公司）；Annexin V-FITC／PI细胞凋亡检测试剂盒（日本同仁化学公司）；胰酶消化液（Beyotime公司）；细胞培养液（Hyclone公司）；胎牛血清（Gbico公司）；青霉素-链霉素溶液（Beyotime公司）；足细胞株（北京北纳创联生物技术研究院）；CP-25由安徽医科大学临床药理研究所合成，纯度大于98%。

1.2 方法

1.2.1 足细胞的培养 待细胞在培养瓶中融合至70%～80%时，此时进行传代，弃去培养基，加无菌PBS洗涤2～3次，加入200μl胰酶消化液进行消化，在显微镜下观察，待细胞变圆皱缩时，弃去消化液，加入新的培养基终止消化，缓慢吹打均匀制成单细胞悬液，随后将细胞悬液转移至新的细胞培养瓶中，放入33℃细胞培养箱，待足细胞增殖至50%～60%时，转移至37℃，5% CO的细胞培养箱进行分化7～14 d。……