冬凌草甲素减轻大鼠脑外伤的作用及机制

王松林，李东波，杨 涛，李从进，宋锦宁，金 涛*

(1陕西省安康市中心医院神经外科，安康 725000；2西安交通大学第一附属医院神经外科；*通讯作者,E-mail:20782635@qq.com)

炎症反应在脑外伤后的继发性损伤中起重要作用[1]。多种炎性因子的释放可加重脑损害，特异性的炎性因子拮抗剂可减轻脑外伤后的继发性脑损害[2,3]。冬凌草甲素是中草药冬凌草的主要成分，属贝壳杉烷型四环二萜类天然有机化合物，研究发现冬凌草甲素可共价结合Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体,从而抑制炎症小体活化，且对NLRP3相关的一些疾病有较好的预防和治疗效果[4]。而冬凌草甲素对脑外伤是否有保护作用尚不明确。

本研究拟探讨冬凌草甲素对大鼠脑外伤后胶质细胞活化、细胞凋亡、炎性因子水平的影响，并探索其潜在的分子机制，为冬凌草甲素治疗脑外伤提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物、试剂及仪器

36只遗传背景相同的SPF级成年雄性SD大鼠(8周龄)购自西安交通大学医学部实验动物中心(许可证号：SCXK(陕)08-018)，合格证号:2007-001，体质量250-280 g。大鼠饲养于(22±2)℃、12 h照明/12 h黑暗的环境中，食水自由，实验前24 h禁食。该实验伦理经西安交通大学医学部生物医学伦理委员会批准。冬凌草甲素(佰世凯化学科技有限公司，28957-04-2)；p38 MAPK抗体(CST，8690)；Phospho-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)抗体(CST，4631)；TUNEL试剂盒(Promega，G3250)；TNF-α、IL-1β、IL-6(R&D Systems，RTA00，RLB00，R6000B)；免疫组化试剂盒(中山金桥，SPN-9001)；GFAG抗体(CST，80788)；Iba-1抗体(Wako,019-19741)。凝胶成像系统(JS-380A，上海培清科技有限公司)；荧光显微镜(BX63，OLYMPUS)。

1.2 实验分组

按照随机数字法对大鼠进行编号(1-36)，将大鼠分为对照组、TBI 3 d组、TBI 3 d+冬凌草甲素(Ori)组，每组12只。对照组仅接受麻醉，TBI 3 d+Ori组在造模后立刻腹腔注射冬凌草甲素(1 mg/100 g)[5]，每12 h后再次给药，连续3 d。……