普通人群间隙连接蛋白β2基因编码区突变分析▲

覃 婷 田 矛 李友琼 龙喜贵 张秀群

(广西壮族自治区人民医院医学遗传与产前诊断中心，南宁市 530021，电子邮箱：2278919254@qq.com)

间隙连接蛋白β2(gap junction protein beta 2,GJB2)基因位于13号染色体q12.11,含2个外显子，编码β2缝隙连接蛋白，在内耳毛细胞及皮肤组织中高度表达，与其他缝隙连接蛋白家族成员在细胞膜上装配形成细胞间连接通道，与细胞间的信号连接通路及离子转运相关[1]。GJB2基因突变可导致遗传性耳聋。本研究采用Sanger测序法检测普通人群的GJB2基因编码区，了解其主要突变类型。

1 对象与方法

1.1 研究对象 于2016年招募无明显听力障碍表现的200例志愿者。纳入标准：(1)研究对象之间3代之内无血缘关系；(2)同意参加本研究并签署知情同意书；(3)无日常生活中可观察到的听力障碍。排除标准：1年之内输血史或干细胞治疗病史。其中男性69例、女性131例，年龄为18～35(23.43±4.48)岁。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 标本采集 采集2 mL外周血，使用华生生物技术有限公司DNA提取试剂盒提取外周血白细胞DNA。

1.3 基因检测 将提取的DNA外送至成都博奥医学检验所，使用Sanger测序法测定所有样本的GJB2基因编码区。引物序列为：GJB2-A-F 5′TGCTTGCTTACCCAGACTCAG-3′,GJB2-A-R 5′TGGGTTTTGATCTCCTCGATG-3′；GJB2-B-F 5′GCCTACCGGAGACATGAGAAG-3′,GJB2-B-R 5′ GCGACTGAGCCTTGACAGCT-3′。在94℃，1 min→(98℃，10 s→60℃，30 s→72℃，40 s)×30个循环→72℃，10 min→10℃条件下扩增GJB2基因编码区域，产物无需纯化。根据ABI 3100测序仪使用手册，使用ABI 3100测序仪对扩增产物进行测序，采用ABI 3100分析软件(3.7NT版)分析测序结果，与NCBI数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中人类GJB2基因标准序列进行比对，判读单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)及InDel位点。

1.4 突变位点临床意义的判读 通过2019年12月19日更新的Version:8.2.1版Deafness variation Database数据库(http://deafnessvariationdatabase.org/)，进行突变位点临床意义判读。

2 结 果

200例志愿者中，共84例检出GJB2基因突变(见表1)。……