水杨酸钠诱导大鼠螺旋神经节细胞发生程序性坏死的研究*

黄巧 尹时华 侯涛 任毅 廖行伟 翟思佳 王晓荣

程序性坏死是由受体相互作用蛋白激酶介导的非依赖半胱天冬酶(caspase)的一种新型细胞死亡方式，在形态上与坏死非常相似，与传统的细胞坏死不同，其可以受调控，且在凋亡介导的胱天蛋白酶被抑制情况下被激活。当被病毒感染或caspase-8激活受抑制时，死亡配体[包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)、Fas配体和TNF相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)]依次进行磷酸化和激活受体相互作用蛋白激酶-1(receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)和受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)，活化的RIPK3使混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)磷酸化，导致MLKL的构象变化，磷酸化的MLKL形成寡聚体，并易位至生物膜上，从而通过形成孔道和破坏膜完整性而导致坏死[1～3]。因此，由RIPK1、RIPK3和MLKL组成的蛋白复合物称为坏死体，是程序性坏死的关键调控分子[4]。一些研究表明RIPK3可能参与螺旋神经节(SGN)的损伤，Wang等[5]利用哇巴因建立SGN损伤模型研究发现，RIPK3介导的程序性坏死参与SGN损伤。Choi等[6]在体外和体内研究发现，RIPK3介导的程序性坏死是顺铂诱导耳毒性的主要细胞死亡途径。但水杨酸钠耳毒性是否存在RIPK1/RIPK3/MLKL途径参与的程序性坏死尚无研究报道。本课题组先前研究发现，水杨酸钠通过激活caspase-3诱导豚鼠耳蜗SGN发生细胞凋亡，但经特异性caspase-3抑制剂处理后凋亡细胞减少不明显，其可能有不依赖caspase-3的凋亡途径存在[7]，由此提出，水杨酸钠可能损伤SGN,可能存在RIPK1/RIPK3/MLKL途径参与的程序性坏死。程序性坏死特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)，对RIPK1作用具有高度特异性，在超过400种人类激酶的筛选中，Nec-1对RIPK1的选择性较其他激酶高出1 000倍以上，其能够抑制RIPK1活性，阻断程序性坏死的进行，在损伤模型中起保护作用[8, 9]。……