促进PPAR-γ表达对TGF-β1诱导人胰腺癌BxPc-3细胞上皮-间质转化的影响

李 博， 施景龙， 魏海雄， 邱厚匡， 许 鸣

1.广东省第二人民医院消化内科，广东 广州 510317； 2.广州市第十二人民医院普外科； 3.深圳市坪山区疾病预防控制中心

侵袭和转移是胰腺癌的重要特征，也是造成胰腺癌患者死亡的重要原因[1]。肿瘤细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的直接后果包括细胞粘附能力下降，穿破基底膜进入血液循环、逃避免疫监视及在远隔部位生长等。近年来对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ，PPAR-γ)与胰腺癌侵袭转移现象的关注逐渐增多，但尚无PPAR-γ在胰腺癌EMT过程中作用的研究。本研究中我们采用TGF-β1诱导人胰腺癌细胞株BxPc-3建立EMT模型，通过观察其在PPAR-γ激动剂罗格列酮作用下BxPc-3形态学、侵袭性改变，及EMT相关标记分子的检测，明确PPAR-γ是否参与人胰腺癌BxPc-3细胞EMT过程中的调节。为进一步研究抑制胰腺癌EMT寻找新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料BxPc-3细胞购自上海中科院细胞研究所；TGF-β1购自Propertech公司；PPAR-γ激动剂罗格列酮购自Sigma公司；胰酶、高糖DMEM培养基购自Gibco公司；Transwell小室购自Coming公司；Matrigel生物胶购自BD公司；鼠抗人PPAR-γ单克隆抗体、N-钙黏蛋白(N-cadherin)单克隆抗体、鼠抗人波形蛋白(Vimentin)单克隆抗体、鼠抗人N-cadherin单克隆抗体、内参磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)购自南京凯基公司。

1.2 细胞培养人类胰腺癌细胞系BxPc-3细胞用含质量浓度为100 mg/L的胎牛血清的DMEM培养液于37 ℃，体积分数为5%的CO2培养箱中培养，细胞均呈贴壁生长。每2～3 d用质量浓度为2.5 g/L胰酶消化传代1次。

1.3 实验分组共分6组：A：TGF-β1组；B：TGF-β1+5 μmol/L罗格列酮组；C：TGF-β1+10 μmol/L罗格列酮组；D：TGF-β1+20 μmol/L罗格列酮组；E：TGF-β1+40 μmol/L罗格列酮组；F：对照组。TGF-β1组细胞给予10 ng/ml TGF-β1处理，其余各组在TGF-β1诱导前2 h加入相应终浓度为5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L的PPAR-γ激动剂罗格列酮，对照组使用含有0.1% DMSO的细胞培养液。……