实时荧光定量PCR筛选鸡基因表达最佳内参基因

李毅毅 张彦华 吴俊锋 张晨曦 康相涛 李文婷

(河南农业大学 动物科技学院，郑州 450000)

实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR，qRT-PCR)由于其众多的优点，在基因表达研究中得到了广泛的应用，已成为量化基因转录表达、揭示基因表达模式的有效方法[1]。但是qRT-PCR结果的准确性受到内参基因表达量的影响，最终使目的基因表达量与真实值之间存在误差[2]。郑嫩珠等[3]研究内参基因对TYR、MITF和ASIP基因在白绒乌骨鸡各组织表达水平的影响时发现选用不同内参基因会得到不同的试验结果。张蓉等[4]在筛选蛋鸡不同组织中稳定性表达的内参基因时发现，常用的GAPDH基因在不同组织间不是稳定表达的，而RPS2和β-actin基因稳定表达。袁振杰等[5]研究表明在性发育不同阶段的济宁百日鸡下丘脑中，表达最为稳定的是GAPDH基因，而在卵巢中表达最为稳定的是β-actin基因。这些研究都表明不同组织、不同发育时期、不同品种等试验条件下内参基因的表达量并非总是恒定的，而合适的内参基因应当不受品种、组织、发育阶段等影响，维持其稳定的表达水平。

本课题组在前期研究SETDB2、SLIT2、和TAPT1基因在不同品种鸡的组织表达差异分析时，以GAPDH为内参基因通过ΔΔCt法计算3个目的基因相对表达量时，3个基因均表现出胸肌、腿肌表达量较低的现象；进一步分析发现，内参基因GAPDH在胸肌、腿肌中的表达量显著高于其他组织，最终由于内参基因表达量不稳定而影响试验结果。因此，为筛选不同试验条件下稳定表达的内参基因，本研究选取……