一例儿童醛固酮和皮质醇共分泌肾上腺瘤的临床表现及全外显子测序分析
2021-03-23 09:08:52王慧萍崔云英马晓森任卫东童安莉
基础医学与临床
2021年3期
王慧萍，文 进，崔云英，马晓森，任卫东，童安莉*
(1.河北北方学院 研究生院,河北 张家口 075000；中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院 2.内分泌科国家卫生健康委员会内分泌重点实验室；3.泌尿外科，北京 100730)
原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism，简称原醛)在继发性高血压中十分常见，国外报道在1、2、3 级高血压患者中原醛患病率分别为1.99%、8.02% 和 13.2%[1]，在难治性高血压中为17%～23%[2]。原醛亚型主要为分泌醛固酮的腺瘤(aldosterone-producing adenoma)和特发性醛固酮增多症[3]，家族性醛固酮增多症等类别较少见。腺瘤约占原醛的35%。家族性醛固酮增多症<1%，儿童患者常见于家族性原醛，罕见发生醛固酮瘤，迄今文献报道儿童醛固酮瘤仅20余例，其临床及基础研究极少，发生机制尚不清。同时合并皮质醇分泌的儿童醛固酮瘤尚未见报道。本研究拟对一例罕见的儿童醛固酮和皮质醇共分泌肾上腺皮质腺瘤患者的临床特点进行分析，并进行全外显子测序，筛选与其发病相关的突变基因。
1 材料与方法
1.1 研究对象
研究对象为一例在北京协和医院诊断并接受手术的儿童醛固酮和皮质醇共分泌肾上腺皮质腺瘤患者。对患者的临床资料进行回顾性分析。收集患者的外周血及手术切除的肿瘤组织，提取DNA，进行全外显子测序及生物信息学分析。用患者肿瘤组织的石蜡切片进行醛固酮合成酶CYP11B2的免疫组织化学染色。本研究获得北京协和医院伦理委员会审查批准(伦理审批编号：S-K431)和患者监护人的知情同意。
1.2 外周血及肿瘤组织全外显子测序及生物信息学分析
收集患者外周血和冰冻的肿瘤组织，根据试剂盒(Qiagen公司)操作说明提取外周血和肿瘤组织DNA，送明码生物科技有限公司行全外显子测序。测序深度>200×,Q30≥80%。
生物信息学分析：取患者外周血DNA全外显子测序结果以及对肿瘤-外周血成对样本过滤筛选组织中体细胞变异：1)保留千人基因组数据库中突变频率<0.1%的位点；2)保留位于外显子区或剪切位点的变异；3)去掉同义突变；4)保留ClinVar数据库或ACMG注释为”Pathogenic”或“Likely pathogenic”的位点；5)保留已报道与肾上腺疾病相关的致病基因突变位点。
