过表达c-SKI抑制异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌纤维化

张 颖，向 燕，张 岳，王 娟

(新疆医科大学第五附属医院 心血管内科，新疆 乌鲁木齐 830011)

心肌纤维化(cardiac fibrosis)是多种心血管系统自身疾病或代谢和免疫系统疾病导致心肌继发性损害等共有的病理过程。心肌纤维化与疾病预后密切相关，患者发生心肌纤维化后心力衰竭及死亡的风险均显著增加[1]。内皮细胞间质转化(endothelial-mesenchymal transition，End-MT)最早作为胚胎发育过程中的一个生理现象，直到证实纤维化的心肌组织中约35%的成纤维细胞是由内皮细胞转化而来，由此认为End-MT是心肌纤维化进程中的重要机制[2]，近年来备受关注。原癌基因c-SKI(cellular Sloan-Kettering institute，c-SKI)是从反转录病毒(avian Sloan-Ketter-ing viruses)中分离出来的，在发育和组织稳态中都有重要作用，涉及神经、造血、肿瘤、遗传和代谢性疾病等多个方面，其关键作用机制就是对TGF-β1/Smad信号通路的负性调节作用[3]。前期研究发现，miRNA-155和miRNA-17可以靶向结合c-SKI，在冠脉内皮细胞中负性调控c-SKI的表达[4]，然而其能否有效改善小鼠心肌纤维化尚未得到验证。本研究利用异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的小鼠心肌纤维化模型，旨在探讨c-SKI是否通过抑制End-MT而发挥抑制心肌纤维化的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：SPF级8周龄雄性 C57小鼠，共40只，体质量(20±2)g[新疆医科大学实验动物研究中心提供许可证号：SCXK(新)2011-0004]，小鼠在实验过程中的处理符合动物伦理学的要求。

1.1.2 主要试剂：c-SKI慢病毒(c-SKI lentivirus,LV-SKI)(湖南长沙赢润生物技术有限公司)；Masson染色试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技有限公司)；RIPA 裂解液、BCA蛋白定量分析试剂盒和Pierce ECL化学发光底物显色(Thermo Fisher Scientificals公司)；c-SKI抗体、CD31抗体、Snail抗体和GAPDH(Cell signaling technology公司)，α-SMA抗体、vimentin抗体、Twist抗体和Slug抗体(Abcam公司)；……