大鼠脑缺血-再灌注后G蛋白偶联受体84的表达升高

赵翀翀，郭文婷，蔡宏斌，王 欢

(兰州大学第二医院 神经内科,甘肃 兰州 730030)

缺血性卒中(ischemic stroke)的基本生理病理学特征是炎性反应、氧化应激和兴奋性毒性诱发的神经元死亡[1]，但是其导致神经元死亡的机制还远未清楚。G蛋白偶联受体84(G protein-coupled receptor 84，GPR84)是G蛋白偶联受体家族的重要成员，主要分布于免疫系统细胞[2-3]。据报道，脂多糖或肿瘤坏死因子可以促进神经胶质细胞中GPR84的表达[4]。在实验性神经病理性疼痛，GPR84通过诱导巨噬细胞中毒性因子的分泌来发挥促炎受体的作用[5]。同时，基因微阵列结果显示：小鼠脑缺血-再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)后GPR84基因的表达升高[6]。这提示：GPR84可能在缺血性脑损伤中发挥着重要作用。因此，本研究拟进一步探讨I/R后GPR84蛋白的表达变化，并初步阐释其功能，为揭示缺血性卒中后脑损伤的病理机制提供新的理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物：雄性SPF级SD大鼠30只(300 g左右)和出生1 d的SD大鼠[兰州大学实验动物中心,SCXK(甘)2018-0002]。

1.1.2 试剂：水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司)；RIPA裂解液和DAPI染色液(Boster公司)；兔抗GPR84抗体(Santa Cruz公司)；小鼠抗NeuN和Iba1单克隆抗体(Abcam公司)；小鼠抗GFAP和GAPDH单克隆抗体(Proteintech公司)；TUNEL试剂盒(上海翊圣生物公司)；GPR84干扰片段(上海吉玛制药技术有限公司)；RFectPM原代细胞小核酸转染试剂(常州百代生物公司)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠的分组及处理：构建大鼠大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型[7]，将大鼠分为假手术组(sham)和脑缺血2 h后再灌注12 h组(I/R 12 h)、24 h组(I/R 24 h)、48 h组(I/R 48 h)、72 h组(I/R 72 h)。

1.2.2 原代大鼠皮层神经元的分离及分组：取出生1 d的大鼠，消毒后处死，在无菌条件下分离并剪碎皮质组织。然后，在37 ℃条件下，利用0.125%胰蛋白酶将组织消化30 min,通过含10% FBS的 DMEM/F12 终止消化；……