过量表达OsRRK1对水稻叶片发育的影响

马银花，莫凯琴，刘璐，李萍芳，金晨钟，杨芳

过量表达对水稻叶片发育的影响

马银花1，莫凯琴1，刘璐1，李萍芳1，金晨钟1，杨芳2

1湖南人文科技学院农业与生物技术学院/湖南省农田杂草防控技术与应用协同创新中心，湖南娄底 417000；2武汉大学生命科学学院/杂交水稻国家重点实验室，武汉 430072

【】（rop-interacting receptor-like kinase 1）属于胞质类受体激酶RLCK Ⅵ家族成员，通过对OE-转基因水稻的叶片形态观察，明确在水稻叶片发育中的作用。依据水稻基因组数据库公布的目标序列设计引物并构建超量表达载体，利用农杆菌介导的遗传转化转入到粳稻品种合江19，通过PCR分析鉴定阳性植株，Southern blot鉴定转基因植株插入外源基因的拷贝数，Northern blot杂交和qRT-PCR鉴定转基因植株在RNA水平的表达情况；选取T2代纯合植株抽穗期的剑叶进行叶片卷曲指数（leaf rolling index，LRI）测定；通过石蜡切片和苯胺蓝染色观察水稻横切后泡状细胞的变化情况，用Image J软件统计泡状细胞的面积；采用叶绿素测定计测量植株叶片叶绿素含量。共获得OE-转基因阳性植株44株，随机选取17株，经Southern blot鉴定8株为单拷贝株系，9株为多拷贝株系；随机选取2份多拷贝株系（OE-1和OE-4）和5份单拷贝株系（OE-5、OE-21、OE-22、OE-24和OE-25）用于后续试验。经分析发现在不同的转基因株系中具有不同程度的过表达情况，其中OE-1、OE-4和OE-25株系超量表达程度高，OE-5株系超量表达程度低，OE-21、OE-22和OE-24株系超量表达程度居中。从中选取OE-5、OE-22和OE-25共3份单拷贝转基因株系和WT对照经Northern blot鉴定后与qRT-PCR结果一致。统计选取的7个株系和WT对照的叶片卷曲指数发现：卷曲程度与表达量呈正相关，表达量越高卷曲程度越高。……