血清DCP、CHI3L1联合AFP检测在肝细胞癌早期诊断中的意义研究

吕桂芳 张春 林建源 林枫 张代场

【关键词】 脱-γ-羧基凝血酶原 壳多糖酶3样蛋白1 甲胎蛋白 肝细胞癌

[Abstract] Objective： To investigate the significance of the combined detection of serum dec-γ-carboxylic prothrombin （DCP）， chitosan enzyme 3-like protein 1 （CHI3L1） and alpha-fetoprotein （AFP） on improving the early diagnosis of hepatocellular carcinoma. Method： A total of 30 patients with early hepatocellular carcinoma admitted to our hospital from June 2014 to May 2016 were selected as hepatocellular carcinoma group， and 30 patients with hepatitis B cirrhosis were selected as cirrhosis group. During the same period， 30 healthy subjects who came to our hospital for physical examination were selected as healthy control group. AFP content was detected by electrochemiluminescence assay， DCP and CHI3L1 content were detected by enzyme linked immunosorbent assay， the above indicators among three groups were compared. Result： Serum DCP， CHI3L1 and AFP levels in hepatocellular carcinoma group were significantly higher than those in cirrhosis group and healthy control group， the differences were statistically significant （P<0.01）. The positive rates of along and three combined tests of serum DCP， CHI3L1 and AFP in hepatocellular carcinoma group were higher than those in cirrhosis group and healthy control group （P<0.01）. The positive rate of the three combined tests was the highest in hepatocellular carcinoma group. Conclusion： Combined detection of DCP， CHI3L1 and AFP can be used as an important indicator for the diagnosis of early hepatocellular carcinoma， and provide a basis for the discovery and treatment of early hepatocellular carcinoma.

[Key words] Dec-γ-carboxylic prothrombin Chitosan enzyme 3-like protein 1 Alpha-fetoprotein Hepatocellular carcinoma

First-author’s address： Mindong Hospital Affiliated to Fujian Medical University， Fu’an 350000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.18.038

肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma， HCC）是全世界第六位常见的癌症，同时也是癌症死亡的第二大常见原因[1]。大约每年有50万新增诊断的肝细胞癌患者，其中超过50%在中国。大部分患者由于其早期无明显症状，往往到医院就诊时已经处于肝细胞癌中晚期，失去进一步手术机会，其5年生存率不足5%。数据显示，早期肝癌的病人在应用外科手术、肝移植或射频消融等综合治疗后，5年生存率可达70%，而进展的肝细胞癌患者，中位生存率少于1年[2]。如何早期发现和诊断肝细胞癌是提高患者疗效和延长生存率的重要研究课题。血清生物标志物由于其采样及检查简便，被认为是理想的早期诊断指标[3]。迄今为止，AFP仍然是诊断HCC最主要的标志物，其在诊断、判断疗效、估计预后、预防复发中有一定的作用。但是单靠AFP不能诊断所有的HCC，易造成假阴性和假阳性。这就给医务工作者提出了更高的要求，需要将现有的肿瘤标志物更加合理地运用于肝细胞癌的早期诊断，或是探究更高灵敏度、特异性、实用性的检验手段来提高HCC的早期诊断率，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年6月-2016年5月在本院住院的早期肝细胞癌患者30例为肝细胞癌组，纳入标准：HBsAg均为阳性，初次检查发现肝肿瘤、肿瘤直径<3 cm，入组前未进行任何治疗（包括外科手术、介入治疗及其他综合治疗）;均符合2009年我国《原发性肝癌规范化诊治的专家共识》诊断标准[4]。排除标准：基础情况较差，合并心脑肺疾病，无法耐受手术治疗。选取同期在本院治疗的30例乙肝肝硬化患者为肝硬化组。纳入标准：均符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》中的相关诊断标准。排除标准：酒精性肝硬化或其他病因导致的肝硬化。同期选择来本院体检的30名健康者为健康对照组。该项研究经医院伦理委员会批准，并取得患者及家属知情同意。

1.2 方法 三组患者检测均采集清晨空腹静脉血5 mL，室温放置1 h，3 500 r/min离心10 min，分离后的血清于-70 ℃冰箱保存待测，所有检测标本无溶血现象。AFP检测采用贝克曼DXI800化学发光仪及配套试剂，记录测定值，并与参考值比较;DCP、CHI3L1检测均采用ELISA法，往预先包被人DCP、CHI3L1捕获抗体的包被微孔中，一次加入标本，标准品，HRP标记的检测抗体，经过温浴并彻底洗涤，用底物TMB显示，TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，并在酸的作用下转化为最终黄色，颜色深浅和样品中的DCP、CHI3L1正相关，用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。对待检测受试者血清进行检测，记录测定值，并与参考值比较：分别以AFP>20 ng/mL、DCP>40 mAU/mL、CHI3L1>79 pg/mL为阳性结果;当三者同时检测，若其中出现一项阳性时就被认为联合检测阳性。ELISA试剂盒均购买于上海生工生物工程有限公司，所有操作均按说明书严格执行。

1.3 觀察指标 比较三组血清DCP、CHI3L1、AFP含量;观察单项标志物检测及三项联合检测在各组中的阳性检出率。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，两组数据比较采用t检验，多组数据比较采用单因素方差分析;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组的一般资料比较 肝细胞癌组男19例，女11例;年龄31～72岁，平均（53.4±6.2）岁。肝硬化组男20例，女10例;28～69岁，平均（52.6±5.8）岁。健康对照组男18名，女12名;年龄21～74岁，平均（51.5±6.1）岁。三组性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 三组血清中DCP、CHI3L1、AFP含量检测结果比较 肝细胞癌组患者血清DCP、CHI3L1、AFP水平均明显高于肝硬化组和对照组，差异均有统计学意义（P<0.01），见表1。

2.3 单项标志物检测及三项联合检测在各组中的阳性检出率比较 肝细胞癌组患者血清DCP、CHI3L1、AFP单项检测阳性率及三项联合检测阳性率均高于肝硬化组和健康对照组（P<0.01）。肝细胞癌组中三项联合检测阳性检出率最高。见表2。

3 讨论

在肝硬化患者中肝细胞癌是其主要的死亡原因，肝细胞癌是我国常见肿瘤之一，也是世界上第三大主要和癌症相关死亡原因[5-6]，其具有发病率高、肿瘤恶性程度高、侵袭力强、早期无明显症状，发现困难等特点，多数患者被诊断出时已处于中晚期，预后不佳，严重影响我国人民健康和生命[7]。目前，临床工作中以筛查HCC主要使用血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP），但发现AFP在诊断HCC时敏感性和特异性不足，郝锐等[8]报道显示，AFP敏感度和特异度分别为56.9%和 83.3%;易造成假阴性和假阳性，需结合超声、CT、MRI等影像技术才可以达到早期诊断。因此对HCC进行准确、灵敏的早期诊断是提高患者远期疗效及存活率的关键。脱-γ-异常凝血酶原（Des-gamma-carboxyprothrombin，DCP），又称为维生素K缺乏或拮抗剂Ⅱ诱导的蛋白（PIVKA Ⅱ），是一种异常的凝血酶原，多种肿瘤中，特别是在 HCC 的恶性增殖过程中起着重要作用[9]。它在肝细胞癌患者的血清中明显升高，在早期肝癌中也有一定升高，而在健康受试者的血清中几乎检测不到[10]。一项Ⅱ期临床研究显示，在肝炎、肝硬化和HCC人群中，诊断HCC的敏感性和特异性分别为89%和95%，可作为AFP的诊断补充。在该项研究中发现，肝细胞癌组患者血清中DCP的阳性率达86.7%，明显高于肝硬化组26.7%及健康对照组0[11]。

壳多糖酶3样蛋白1（chitinase 3-like 1，CHI3L1），又名几丁质酶3样蛋白1，编码 CHI3L1的基因位于小鼠和人类的1号染色体上[12]。CHI3L1 是最近发现的一种由中性粒细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞、软骨细胞和肿瘤细胞等分泌。既往研究表明，CHI3L1蛋白水平与肝癌、肺癌、胃癌和乳腺癌等多种肿瘤相关[13]。至今为止，CHI3L1参与HCC的肿瘤恶性生物学行为的详细机制尚未完全阐明[14]。有研究报道CHI3L1在HCC患者肿瘤组织中异常增高[15]，并且与肿瘤组织中血管内皮生成正相关[16]，并与多种肿瘤的预后相关，尤其同HCC预后评估有关。

目前对选择两种或两种以上肿瘤标志物同步进行联合检测是提高相关肿瘤诊断的方法，特别是对于肝细胞癌诊断阳性率有着重要意义[17-18]。本研究选择通过AFP联合DCP、CHI3L1三个标志物进行检测，结果表明，肝细胞癌组各项检测指标均高于肝硬化组及健康对照组，与各标记物单独检测比较，AFP联合CHI3L1及DCP三项标志物进行检测可以明显提高肝细胞癌的诊断阳性率，有效降低了早期肝细胞癌漏诊的可能。

综上所述，DCP、CHI3L1及AFP三项联合检测，具有灵敏度高、特异性好，同时由于它采血量少，操作简便，便于广大基层医院展开检测，有利于肝细胞癌的早期筛查。因此，DCP、CHI3L1及AFP三项联合检测，对提高肝细胞癌早期诊断率具有重要意义，但要最终确诊肝癌，仍需要结合影像学及病理学检查等相关资料，避免误诊。

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（收稿日期：2020-09-03） （本文编辑：姬思雨）