miR-106b对肝癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制

王正 陈闯 丁志龙 徐震 吕春阳

作者单位：223002 淮安 淮安市第二人民医院肝胆外科

肝癌是全世界发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一，且近年来呈逐年递增趋势，严重威胁人类生命健康［1］。手术是肝癌首选的治疗方式，但大多数患者确诊时已为中晚期，失去手术治疗机会，且即使可手术的患者术后5年复发风险仍较高，因此总体治疗效果并不理想［2-3］。随着放疗设备和技术的不断发展，放疗在不可切除肝癌患者中的作用凸显，但是放疗抵抗成为极大影响疗效的一大问题［4］。微小RNA（miRNA）是一类可调节并修饰不同靶点的单链非编码小分子RNA。既往研究显示，miRNA在调控肿瘤细胞对放化疗敏感性中发挥重要作用［5］，其中miR-106b在肝癌HepG2细胞中表现出增强细胞迁移、侵袭功能［6］，在结肠癌中发现能增强肿瘤细胞的放疗抵抗作用［7］，但在肝癌放疗中miR-106b的作用及机制并不清楚。本研究旨在构建miR-106b下调的肝癌HepG2细胞模型，探讨miR-106b对肝癌细胞放疗敏感性的影响及可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料及试剂

人肝癌细胞株 HepG2、SMMC-7721、SK-HEP-1、Huh7及正常肝细胞株QSG7701购自美国ATCC细胞库；胎牛血清购自澳大利亚AusGeneX公司；CCK-8试剂购自日本同仁化学研究所；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自哈尔滨新海基因检测有限公司；PI3K、AKT、PCNA、Bax及 GAPDH 抗体购自 Abcam公司；p-PI3K抗体购自Bioworld公司；p-AKT抗体购自美国Omnimabs公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔购自美国Santa公司；无序siRNA、miR-106b siRNA、miR-106b引物、U6引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.2 细胞培养及分组

将 HepG2、SMMC-7721、SK-HEP-1、Huh7、QSG7701细胞培养于含10%胎牛血清、双抗（青霉素、链霉素各100 U/mL）的DMEM培养基中，并置于37℃、5% CO2培养箱中培养，细胞融合率达70%～80%时，用胰蛋白酶消化、传代培养。……