表达重组包涵体蛋白的变性溶解及复性研究

高应瑞，刘珂飞

（天津生机集团股份有限公司 300384）

1 包涵体蛋白溶解

尿素，盐酸胍和强离子洗涤剂如N-月桂酰肌氨酸是最常用的溶解剂。在变性剂溶液中溶解包涵体可能是一种已经很明确的方法，但是可能聚合可溶性低聚物。鲜为人知的是，在变性溶液中可能会形成聚合物。在变性剂溶液中，由于离子变性的作用，在蛋白复合物之间产生强大的静电斥力，进而将包涵体分散为单分子结构[1]。

通常情况下，浓度为6～8M的尿素和6～7M的盐酸胍可以实现蛋白质的溶解。然而，即使在浓度最高的情况下，蛋白质分子内和分子间发生的相互作用往往也可导致非天然结构的形成，在变性剂含量降为中等浓度时，其（尿素和盐酸胍）与蛋白质的结合力也降低，因此，蛋白质分子开始重新折叠。因此，它有可能通过调节盐酸胍和尿素的浓度来调节其与蛋白的结合力，以至于使复性过程更加有效。这种情况不包括洗涤剂在内。洗涤剂与蛋白的结合力决定于其临界胶团浓度(CMC)的大小。这种胶团结合往往在临界胶团浓度之上，即变性非折叠蛋白溶解性好的条件下发生，而这种胶团结合不能或者很少能在临界胶团浓度之下，即蛋白溶解性差的条件下发生[2]。

这表明，只有在洗涤剂存在的条件下，蛋白复性过程才能发生，否则，去除洗涤剂后，蛋白质结构和溶解度又将形成原包涵体。

2 蛋白复性

复性过程是蛋白质构象从展开状态到折叠状态的变化过程。包涵体只能由强变性剂溶解，使其蛋白质呈展开状态，其溶解程度主要取决于蛋白质本身及其所使用的变性剂类型。……