影响ELISA试验检测结果的环节及试验成功的关键

郭红佳 , 普朝华

（1.新平县动物疫病预防控制中心 653400；2.新平县畜牧推广站 653400）

ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay），酶联免疫吸附测定，指将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。具有灵敏度高、特异性好、稳定性强、适合批量操作等特点，被广泛应用于临床医学、动物疫病诊断、食品安全检测等领域。

1 ELISA试验操作环节

1.1 试剂。试剂盒的质量直接影响检测结果的准确性，试剂盒质量不过关或者存储不当，导致试剂中抗原抗体的活性降低、失活，酶结合物浓度过高或偏低都将影响试验结果。

1.2 待检样品。常用的待检样品一般为血清（血浆），样品采集中若出现溶血、细菌污染， 很可能造成样品假阳性，影响检测结果准确性。

1.3 仪器设备。 试验前校准移液器，提前预热酶标仪，检查其能否正常工作。

1.4 操作

1.4.1 回温: 试剂盒未回温将影响检测结果的准确性。试验前需将试剂盒从冰箱取出回温至25℃，使用前各试剂充分混匀。

1.4.2 样品稀释: 样品的稀释倍数、方法，试剂盒操作说明均有严格规定，未按试剂盒说明书要求对待检血清进行稀释，或稀释液与血清混合不均匀，将影响试验检测果。

1.4.3 洗液配置: 洗涤是ELISA试验中操作次数最多的步骤，也是非常重要的一步。未严格按说明准确配置洗液，导致洗液浓度过高或偏低，造成洗板效果不佳，影响检测结果准确性。

1.4.4 加样: 加样太快，液体溅出或产生气泡；未垂直加样，液体留在孔壁；加样次序未按说明书进行；……