环介导等温扩增技术的应用进展

刘旺, 靳晶豪, 陈孝仁

扬州大学园艺与植物保护学院, 江苏 扬州 225009

基因扩增是分子生物学领域的基本研究手段之一，传统的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)以及在此基础上发展起来的荧光定量PCR、免疫PCR等技术能够实现对生物体核酸的有效扩增与检测，但是由于存在所需仪器设备昂贵、反应时间过长等缺点，使得以PCR为基础的核酸扩增技术在现场快速检测和基层的应用推广中受到了一定的限制。

随着分子生物学技术的不断发展，新技术不断涌现。Notomi等[1]首次报道了环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)。该技术是一种新颖的核酸扩增技术，只需要在恒温(60～65 ℃)条件下反应30～60 min甚至更短时间即可完成核酸的扩增，无需使用昂贵的PCR仪[2]。LAMP技术能实现核酸扩增的核心之一就是使用2对特异性强的特殊引物：1对内引物和1对外引物。为了便于描述，将靶基因的目的序列进行命名(图1A)，引物结构如图1B所示，外引物的碱基数量和浓度均需低于内引物，以保证内引物先于外引物和靶基因进行配对反应。LAMP技术的另一核心就是合成酶的选用。它使用的BstDNA合成酶具有非常重要的链置换活性，使得LAMP扩增过程中发生链置换反应，即DNA聚合酶在延伸新链的过程中如果遇到了下游双链，可以继续延伸反应并同时将下游双链剥离而产生游离的单链。这两者是LAMP技术能够进行核酸扩增的重要基础[3]。

A:靶基因序列命名；B:LAMP引物结构图图1 LAMP扩增结构图[3]Fig.1 The structure of LAMP[3]

与传统PCR技术相比，LAMP技术具有诸多优点：特异性更强；灵敏度更高；……