miR-365 对胃癌SGC-7901 细胞的作用及其机制

郑启炜，塔拉，白瑞霞

（内蒙古自治区人民医院检验科，内蒙古 呼和浩特 010017）

胃癌是一种发生在人的胃黏膜上皮细胞中的恶性肿瘤。我国胃癌高发，据统计每年胃癌新增病例接近40 万[1，2]。并且胃癌在我国各种恶性肿瘤中发病率居首位，每年约17 万人死于该病。miR-365抑制胃癌细胞的增殖，并普遍参与多种消化道肿瘤的发生、发展[3]。细胞周期失控、超常运行等情况都会导致癌瘤的发生，如果停滞不前细胞将衰老和凋亡。其中Cyclin D1在细胞从G1期进入S期的过程中发挥着重要作用，也决定着细胞能否能继续的生长与增殖[4]。p21 基因是细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂家族中的一个重要成员[5]。与肿瘤的抑制作用密切相关[4]。本研究通过探究miR-365对胃癌细胞的影响，以期为新的调控胃癌的发生、发展，具体机制的研究以及治疗来开辟新的思路和途径。

1 材料与方法

1.1 材料

大学病原生物与免疫学研究室惠赠RGM-1 细胞和SGC-7901 细胞；转染试Lipofectamine2000（Invitrogen），实时荧光定量PCR 等实验所用试剂均购于大连宝生物工程公司；由上海英潍捷基贸易服务有限公司合成实验所需的质粒表达载体。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养RPMI-1640培养基中培养细胞。

1.2.2 实时荧光定量PCR 方法检测miR-365 的表达取对数生长期的SGC-7901 细胞，提取细胞总RNA 设计miR-365 及内参基因的PCR引物，以相应的cDNA 作为模板，扩增按照实时荧光定量PCR试剂盒说明书进行。

1.2.3 细胞转染将对数生长期的SGC-7901 的细胞收集，随机分为3 组：miR-365 转染组，阴性对照转染组和空白对照组。转染组中加入3μg的miR-365 mimics 和300 μL脂质体。将质粒和脂质体分混合均匀后加入培养基中。……