鸽圆环病毒新疆株全基因组克隆与序列分析

米晓云，吴建勇，马文戈，日孜瓦古·努尔东，王琦，盛肖刚，黄炯，魏玉荣*

（1新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐，830013）

（2巴音郭楞职业技术学院，新疆 库尔勒，841000）

（3新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆 乌鲁木齐，830013）

鸽圆环病毒（Pigeon circovirus，PiCV，又称Colum⁃bid circovirus，CoCV）是已知最小的致病性病毒，呈二十面体对称球形，无囊膜，直径为17～22 nm，基因组由大约1.7～2.3 kb的单链环状DNA组成［1−2］。PiCV于1993年在美国被首次报道，此后许多国家和地区陆续发现该病［3−4］。余旭平等［5］于2009年在浙江地区鸽群中检测并报道了国内首例PiCV。随后，福建、江苏、上海、山东、河北、安徽、广东等地均有PiCV病例报道［6］。PiCV的全基因组于2000年首次被克隆［7］。国内全基因组克隆并序列分析的毒株有ZJ1株、ZJ2株、FJ1株及JS15−1株［5,8−9］。虽然不同毒株之间有着微小的长度变化，但是基因组均含5个开放阅读框（ORF），分别是V1、C1、C2、以及3'基因间区和5'基因间区［10−11］。ORF V1 以 ATG 为起始密码子编码含315～318个氨基酸的复制相关蛋白（Rep）。ORF C1以ATG/ATA为起始密码子编码含270～274个氨基酸的病毒外壳蛋白（Cap）［11］。其他ORF的功能目前未知。

本文根据已发表的PiCV全基因组序列设计引物，对采集于和田地区墨玉县种鸽场已检测呈PiCV阳性的病料进行全基因组序列克隆和测序，并进行序列分析，为疫苗候选开发提供参考资料。

1 材料与方法

1.1 试验材料

新疆和田地区墨玉县规模化种鸽场3—4月龄病鸽样本（心、肝、肺、大肠及喉管），采集后−20℃保存备用。

1.2 试剂

TIANamp Virus DNA/RNA Kit、2xPCR MasterMix购自天根生化科技（北京）有限公司；5 000 bp DNA Marker购自宝生物工程（大连）有限公司；Wizard®SV Gel and PCR Clean−Up System、Wizard® Plus SV Minipreps DNA Purification System购自普洛麦格（北京）生物技术有限公司；pEASY−T1载体、Trans1−T1 Phage Resistant Chemically Competent Cell购自北京全式金生物技术有限公司。……