α-辅肌动蛋白4 和钠氢交换子调节因子1 在微电场刺激人宫颈癌Hela 细胞迁移中的作用机制＊

陈瑾歆，王含彦，唐 珍，张 燕

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，其预后与有无转移关系密切，如伴有转移，即使是早期预后也相对较差［1］，因此研究宫颈癌的转移机制对该病的治疗及预后评估有重要意义。

内源性生物电场（direct current electric fields，DCEF）在机体许多生理及病理过程如细胞分化、形态发生、血管新生和组织再生等中都具有重要作用［2］。有研究［3］显示，细胞在生理强度的外加电场中会出现生物学行为改变如定向排列、定向迁移等，这在创伤愈合、肿瘤侵蚀等病理过程中可能发挥重要作用［4］。目前微电场对肿瘤细胞侵蚀转移的影响已成为人们对电场生物学效应的关注焦点［5］，细胞对电信号反应的机制尚不清楚。笔者采用宫颈癌Hela 细胞，通过RNA 干扰钠氢交换子调节因子1（NHERF1）mRNA 的表达，研究微电场中NHERF1是否经过α-辅肌动蛋白（α-actinin 4）影响Hela 细胞的迁移能力，为进一步研究宫颈癌的转移机制打下基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和试验分组人宫颈癌Hela 细胞从中国科学院上海细胞所购进；TRIZOL（Invitrigon）；PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser（Takara）；SYBR Green PCR Kit （QIAGEN）；RPMI1640 培养基（Gibco）；胎牛血清（BI）。

试验分为阴性对照组（control）、加电组（EF）、NHERF1 基因沉默组 （siRNA）、基因沉默加电组（siRNA+EF）。

1.2 培养细胞的电场干预细胞加电培养小室的组装和细胞加电的步骤见文献报道［6］。加电组加电条件：150 mV/mm 微电场刺激8 h。

1.3 基因沉默

1.3.1 siRNA 序列合成 NHERF1 的siRNA 序列由上海权阳生物公司设计合成，相关序列如下：NHERF1 siRNA-1：sense GAAGGAGAACAGUCGU GAATT，antisense UUCACGACUGUUCUCCUUCTT；NHERF1 siRNA-2：sense CGAGGAGCUGAAUUCC CAATT，antisense UUGGGAAUUCAGCUCCUCGTT；NHERF1 siRNA-3 sense GGUGGAGGUGAACGGC GAATT，antisense UGCGCCGUUCACCUCCACCTT；阴性对照siRNA：sense UUCUCCGAACGUGUCACG UTT，antisense ACGUGACACGUUCGGAGAATT。

1.3.2 siRNA 转染 取对数期生长的细胞，种植在加电小室中，常规培养至60%～70%的融合状态进行转染，参照LipofectamineTM 2000 说明书的转染条件和方法用siRNA 1、2 和3 及阴性对照siRNA转染hela 细胞，5%的CO2、37 ℃恒温培养箱内培养4～6 h 后更换为完全培养基培养24 h。……