T13纳滤膜通量与聚体含量相关性的初步研究

胡伟伟 谢一龙 苏贤德 陆建胜通讯作者）

正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司 江苏南京 210000

用哺乳动物细胞培养来生产的生物制品，病毒污染风险是一个主要的安全问题。为了确保产品的安全，监管机构需要生产商证明生产产品的工艺有足够的病毒去除能力，并在生产过程监控纳滤载量不超过病毒验证的载量[1-4]。

除病毒过滤通过分子排阻原理实现去除病毒，作为一种能够高效去除病毒的方法，广泛用于治疗性蛋白药物下游纯化工艺。由于纳滤膜成本高且一次性使用，因此迫切需要通过获得最高的过滤膜载量，降低纳滤工艺成本。因此，从安全性、成本以及法规监管的角度出发，设计一个既能满足高通量，又能高效的病毒的工艺至关重要[5]。

在中试室放大生产过程中发现，T1320150401批次1000L规模纯化时，纳滤过程中出现通量快速衰减、纳滤膜堵塞的现象，导致膜通量急聚下降，为了保持纳滤工艺的稳定性，通过纳滤小试的分析，确定影响通量的限制性因素。

1 实验材料和实验方法

1.1 实验材料

1.1.1 样品

T1320150401批次原液样品，SEC主峰含量96.5%，浓度25.6g/L。

1.1.2 试剂和耗材

配置缓冲液的试剂均为化学纯，购自南京晚晴化玻仪器有限公司；纳滤膜Viresolve Pro（面积3.1cm2）、Viresolve Pro Modus1.2（面 积0.07m2）、Viresolve Pro Modus1.3（面 积0.22m2），拦截尺寸为20nm（病毒颗粒大于20nm，蛋白分子为10-15nm），均购于Merck Millipore。

1.1.3 仪器

层析系统为ÄKTA Purifier、ÄKTA Process购自GE公司；UV-1200紫外分光光度计购自上海美普达，电子天平（精度0.01，量程大于500g）购于梅特勒。

1.2 实验方法

1.2.1 不同纯度样品的制备

T1320150401批次原液通过阳离子层析精制两个纯度样品，样品一：SEC纯度98.0%，聚合物1.92%，编号为NF-1；……