近视相关RDH5基因内含子区单核苷酸多态性位点rs3138144(G>C)对其启动子功能的影响△

肖丹 兰长骏 杨琴 刘阳 谭青青 廖萱

近视是最常见的一种屈光不正，它的发病率和严重程度正在逐年增加。预计到2050年近视患者将达到世界人口的49.8%，且近10.0%的人将会成为高度近视[1]。目前人们普遍认为近视是一种遗传和环境因素共同作用的复杂疾病。近年来，科研人员利用全基因组关联分析(genome wide association study，GWAS)进行了大量的研究，成功鉴定了新的近视易感基因座[2-3]，也对近视相关的环境因素[4-5]进行了分析。GWAS的研究结果表明，光依赖性视网膜-巩膜信号转导会引起屈光不正，进一步证实了近视的“视网膜局部调控学说”[6]。另有研究发现，在近视发生发展的过程中，作为信号中继站的视网膜色素上皮(RPE)和脉络膜[7]，以及作为重要信号分子的视黄酸都发挥重要作用[8]。

视黄醇脱氢酶5(RDH5)基因为视黄酸代谢相关基因，主要表达于RPE细胞并参与视觉循环中11-顺-视黄醇的循环。研究人员基于大规模近视GWAS所得数据[9-10]，利用生物信息学方法在近视显著关联的遗传易感基因区域及位点中鉴定出潜在的功能变异RDH5 rs3138144，其等位基因频率分布在近视组与对照组之间的差异有统计学意义，并且多项生物信息学证据支持其具有功能效应[11]。本研究进一步调查近视相关基因RDH5内含子区单核苷酸多态性(SNP)位点rs3138144(G>C)对其启动子功能的影响，探讨RDH5基因表达调控的分子机制，以期为近视发病机制的研究提供参考资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞及质粒人RPE细胞株ARPE-19(四川大学华西医院)，人肾上皮293T细胞系HEK293(川北医学院转化医学实验室)，DH5α大肠杆菌细胞株(天根生物公司)，双荧光素酶报告载体pGL3-Basic 和pRL-TK(Promega公司)。