早期隐性梅毒对慢性HIV感染者CD4+T及CD8+T淋巴细胞内Caspase-1/3水平的影响

宋冰冰 赵金雪 翁文佳 高艳青

1首都医科大学附属北京康复医院皮肤科,北京，100041；2北京市房山区第一医院皮肤科，北京，102400；3首都医科大学附属北京佑安医院皮肤科，北京，100069

随着HIV/AIDS的流行及其他危险因素的增多，如男男性接触(men who have sex with men，MSM)、静脉注射毒品，梅毒合并HIV的感染率越来越高。研究发现两种疾病可相互作用，如梅毒合并HIV感染且CD4+T淋巴细胞<350个/μL，发生神经梅毒概率增高[1，2]；另外，合并梅毒感染会加快HIV患者CD4+T淋巴细胞计数下降、HIV载量升高，促进HIV感染进展为AIDS[3]。既往课题组研究[4]发现梅毒感染加快HIV感染者CD8+T淋巴细胞的凋亡，并且除了活化诱导的凋亡外，可能存在其他的机制。而对于HIV感染者CD4+T淋巴细胞，研究发现HIV有效感染的活化CD4+T细胞发生死亡是通过Caspase-3介导的凋亡，HIV无效感染的静止CD4+T淋巴细胞发生死亡是通过Caspase-1诱导的焦亡[5]。而梅毒是否能通过上述途径加速CD4+T及CD8+T淋巴细胞的死亡尚未有明确报道。本研究通过观察早期梅毒感染对HIV感染者CD4+T及CD8+T细胞Caspase-1/3水平的影响，初步探索早期隐性梅毒感染对HIV感染者外周血中CD4+T及CD8+T淋巴细胞凋亡和焦亡的影响。

1 材料与方法

1.1 病历资料 研究对象来自我院感染中心规律随访的MSM队列。18例早期隐性梅毒合并慢性HIV感染(外周血CD4+T淋巴细胞计数≥350个/μL，HIV感染时间>6个月) ，早期隐性梅毒定义为感染2年内仅有梅毒血清学改变，但无任何临床表现；18例慢性 HIV感染(外周血CD4+T淋巴细胞计数≥350个/μL，HIV感染时间>6 个月)。除外年龄<18岁、妊娠、合并其他感染性疾病者，如结核感染等。合并组确诊梅毒后经过苄星青霉素240万U驱梅治疗，每周一次，共三次。所有HIV感染者均未进行抗高效逆转录病毒治疗(HAART)。见表1。

表1 两组患者基线资料

1.2 研究方法

1.2.1 Ficoll-Hypaque密度离心法分离PBMC 合并组及HIV感染组取冻存PBMC，于42℃恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)，快速晃动冻存管，使冻存的细胞在1 min内解冻。

1.2.2 荧光染色 复苏好的PBMC加入表面抗体标记(CD3-APC，CD4-PERCP，CD8-APC-cy7)，室温避光染色20 min。细胞内染色：加入Caspase-3，Caspase-1抗体，室温孵育45 min，PBS洗涤2次后，用2%多聚甲醛重悬细胞，上流式细胞仪检测。

1.2.3 CD4/CD8及细胞内Caspase-1/Caspase-3测定 采用FACS Calibur型流式细胞仪(美国BD公司)检测，并采用 Flowjo 7.6.1软件进行数据分析。

2 结果

2.1 两组CD4+T淋巴细胞中Caspase-1/3含量的比较 见图1、2 。单纯HIV感染组及合并组CD4+T淋巴细胞中Caspase-1含量分别为(0.132±0.098)、(0.463±0.676)，合并组高于单纯HIV组，两组间差异有统计学意义；单纯HIV感染组及合并组CD4+T淋巴细胞中Caspase-3含量分别为(4.717±7.35)、(9.433±11.85)，两组未见统计学差异。

图1 HIV单纯感染组和HIV合并早期隐性梅毒感染组中CD4+T淋巴细胞中Caspase-1含量情况，*P<0.05 图2 HIV单纯感染组和HIV合并早期隐性梅毒感染组中CD4+T淋巴细胞中Caspase-3含量情况，*P<0.05 图3 HIV单纯感染组和HIV合并早期隐性梅毒感染组中CD8+T淋巴细胞中Caspase-1含量情况，*P<0.05 图4 HIV单纯感染组和HIV合并早期隐性梅毒感染组中CD8+T淋巴细胞中Caspase-3含量情况，*P<0.05

2.2 两组CD8+T淋巴细胞中Caspase-1/3含量的比较 见图3、4。单纯……