miR-21-5p抑制缺氧诱导的肺动脉内皮细胞损伤

崔艳红，刘培培，孙潺

（南阳市中心医院呼吸内科二病区，南阳 473000）

肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension，PAH）是一种极具破坏性且能危及生命的疾病，其特征是肺血管阻力和肺动脉压的持续增加，并导致右心功能障碍[1]。虽然已提出了许多假说，但目前PAH进展的具体调控机制仍不明确。近来研究表明，慢性缺氧是PAH患者血管重构的重要刺激因素[2，3]，低氧诱导的肺动脉内皮细胞（pulmonary artery endothelial cell，PAEC）损伤在PAH的血管重构中发挥重大作用[4，5]。然而，影响PAEC损伤反应中涉及的具体分子机制仍不完全清楚。

微小RNA（microRNAs，miRNAs）是一类长度约为21～23个核苷酸的小的非编码单链RNA分子，其可通过与特定mRNA靶标的3’-非翻译区（untranslation region，UTR）相互作用而在转录后下调基因表达[6]。miRNAs在胚胎发育、细胞增殖、迁移、凋亡和免疫应答等多种生物过程中起调节作用[6，7]。生物信息学预测表明30%以上的基因受miRNA调控[7]。在慢性缺氧和野百合碱诱导的PAH大鼠模型中，已经明确指出众多miRNAs参与调控PAH的进展[8]。miR-21-5p作为miRNAs的一员，其已被证明是包括肿瘤细胞、内皮细胞和平滑肌细胞在内的许多细胞类型的缺氧敏感性标记物[9，10]。目前，miR-21-5p在缺氧导致的PAEC损伤中的主要功能尚不清楚。因此，本研究通过构建缺氧刺激诱导的HPAEC损伤模型研究miR-21-5p的功能，并阐述其中涉及的分子机制。

材料和方法

1 主要试剂与材料

DMEM培养基和胎牛血清（Gibco公司）；L-谷氨酰胺、内皮细胞生长添加剂（endothelial cell growth supplement，ECGS）、肝素钠和脂质体Lipofectamine 2000（Invitrogen公司）；miR-21-5p模拟物（miR-21-5p mimic）和miR-21-5p的阴性对照物（miR-NC）（上海万生昊天生物技术有限公司）；Krüeppel样因子6（Krüeppel-like factor 6，KLF6）过表达载体质粒（pcDNA-KLF6）和对照载体质粒（pcDNA-Con）（上海生工生物工程股份有限公司）；……