A549细胞条件培养基对人骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响

王璐璐，刘丹阳，李永涛，金海峰，姜杨，张善强，沈雷

1.齐齐哈尔医学院解剖学教研室，黑龙江齐齐哈尔161006；2.齐齐哈尔医学院组织胚胎学教研室，黑龙江齐齐哈尔161006

肺癌患病率位居恶性肿瘤之前列，全世界每年大约有60万人死于肺癌[1]。尽管手术、化学药物治疗或放射治疗等不同治疗策略被应用于临床实践，但是却仍然无法阻止肺癌的进展[2]。肺癌组织内也含有肺癌干细胞[3]，并认为肺癌干细胞有可能来源于间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSC）[4-5]，MSCs具有较强的归巢特性可能是造成肺癌等肿瘤浸润或发生转移的因素之一[5-6]。关于肺癌微环境对MSC增殖等细胞生物学影响还需要深入研究。

趋化因子能够与MSCs表面相应受体相互结合，促进细胞迁移归巢能力的肽类家族[7]。白细胞介素-8（Interleukin-8,IL-8）与乳腺癌、结肠癌转移和复发密切相关[8]。该实验从趋化因子角度验证肺癌A549细胞上清液对hBMSCs增殖和凋亡的影响，为抑制肺癌细胞增生提供研究基础。

1 材料与方法

1.1 细胞

人正常肺上皮BEAS-2B细胞、人肺癌A549细胞和人骨髓间充质干细胞（Human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSC）均购于美国ATCC公司。

1.2 主要试剂和仪器

人IL-8、Akt、P-Akt蛋白ELISA试剂盒购于美国R&D公司；MTT、二甲基亚砜（DMSO）购于美国Sigma公司；Annexin V-PI细胞凋亡试剂盒购自美国Hyclone公司。美国Bio-Rad公司的Bio-Rad 550酶标仪；美国BD公司FACSAriaⅡ型流式细胞仪。

1.3 实验方法

1.3.1 细胞培养10%胎牛血清的DMEM培养基分别培养BEAS-2B细胞和A549细胞；hBMSCs用含10%胎牛血清的α-MEM培养基培养。

1.3.2 提取细胞上清液4×106 BEAS-2B细胞和A549细胞在37℃，5%CO2培养12 h后，800 rpm离心5 min，分别提取两种细胞上清液，0.22μm滤器抽滤。

1.3.4 细胞分组BEAS-2B细胞和A549细胞上清液用含1%胎牛血清的α-MEM培养基按体积比1:4稀释为条件培养基（Conditioned medium，CM）。……