高效液相色谱法测定磷酸吡哆醛中维生素B6及其有关物质

陈 健 ,陈奀飞 ,王 莉 ,盛 力 ,沈大冬 ,韩忠耀

(1.浙江医药股份有限公司研究院,绍兴 312500;2.黔南民族医学高等专科学校,都匀 558000)

磷酸吡哆醛(PLP)是维生素B6(VB6)的主要辅酶活性形式,参与多种氨基酸代谢转化[1-2],其结构式见图1。其中,涉及氨基酸多种反应,在代谢转换、物质合成中发挥着极为重要的作用[3]。PLP 既可以作为药物用于临床,促进转氨作用提高体内多巴胺的含量[4],进而用于治疗帕金森综合征[5];也可以作为其他原料药的起始物料,用于合成β-羰基酰胺类药物等研究[6]。

图1 PLP的结构式Fig.1 Structural formula of PLP

PLP一般以VB6为原料合成[7-8],因此,在PLP质量研究中,VB6(已知杂质)和其有关物质(未知杂质)的含量测定具有十分重要的意义。长久以来,起始物料的质量控制在原料药注册技术要求中一直有着举足轻重的地位,人用药品注册技术要求国际协调会议(ICH)及各国药审监督机构相继出台相关技术要求予以规范。目前,对于PLP 的研究,主要以合成工艺改进、生物代谢转化[9-10]及临床治疗[11-12]居多,对于其质量控制的相关研究鲜有报道。

本工作应用高效液相色谱法(HPLC)建立了PLP中VB6及其有关物质含量测定的方法,为PLP质量标准的建立,提供更为科学的试验依据和方法参考。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260型高效液相色谱仪,配紫外检测器(VWD)、二极管阵列检测器(DAD)和Agilent Open Lab CDS2.3色谱工作站;XS205型分析天平;S220型pH 计。

磷酸二氢钾-1-庚烷磺酸钠缓冲溶液:称取0.85 g磷酸二氢钾和3.0 g 1-庚烷磺酸钠,溶于1 L水中,并用三氟乙酸调节溶液pH 至3.0。

稀释剂:称取磷酸氢二钾4.33 g溶于1 L水中,作为试验中配制溶液的稀释剂备用。……