小鼠椎间盘退变模型的CBX8改变△

周 旭，丁 悦，王明飞，刘铖祎，蔡 叶

（上海中医药大学附属普陀医院，上海 200062）

腰椎间盘突出症是脊柱外科临床中非常常见的一类退变性疾病，是引起腰腿痛的常见原因；症状严重者可导致下肢功能障碍，甚至瘫痪；给社会造成巨大的经济负担［1-2］。好发年龄在20～50岁、病因主要为与年龄有关的退行性变［3-4］。染色质结合蛋白（chro⁃mobox protein homolog 8,CBX8）属于 polycomb group（PcG）蛋白家族，其家族成员参与了调控细胞增殖分化；控制基因表达的稳定［5-7］，甚至失衡导致恶性肿瘤的发生［8-9］。现有报道脊柱退行性疾病的发生与细胞DNA的损伤有一定的关联［10］，而CBX8作为PcG蛋白家族成员参与了DNA损伤修复。然而CBX8在小鼠椎间盘髓核细胞的体内表达以及功能还未知，因此本研究制备CBX8小鼠的针刺椎间盘退行性疾病模型，分别于针刺后8、12、16周进行检测，观察小鼠脊柱的稳定性、椎间隙高度、髓核细胞的衰老以及炎症介质的表达情况，评估椎间盘退变程度以及CBX8与小鼠椎间盘退变的相关性。

1 材料与方法

1.1 实验动物与材料仪器

SPF级C57BL/6小鼠，18～20 g，雄性31只。主要实验试剂：Tris-SDS分离胶缓冲液（pH8.8），Tris-SDS浓缩胶缓冲液（pH6.8），PMSF，ECL-化学发光液，15-150KDa双色预染maker，BSA，RIPA裂解液（强）等。主要仪器：恒温摇床，化学发光仪，磁力搅拌器，匀浆器，低温高速冷冻离心机，电转仪，垂直电泳仪，酶标仪等。

1.2 体外实验

1.2.1 体外髓核细胞分离与培养

取3只小鼠，雌雄不限。以0.5%戊巴比妥钠0.1mg/kg体重腹腔注射，麻醉后采用心脏采血方法处死，后立即浸泡于75%乙醇30 min，消毒皮肤后放置超净台中解剖。铺无菌手术巾，取后正中切口，取出整个腰椎，尖刀切开纤维环,将髓核完整取出并剪碎至约1 mm3，随即放入0.25%的胰蛋白酶液中37℃下消化25 min。……