小鼠血清外泌体不同提取方法的比较

邱山桐，张 昊，沈雅丽，潘阳阳，曾巧英，王 萌

（甘肃农业大学 动物医学院，甘肃 兰州 730070）

外泌体是指包含了多种mRNA、miRNA和蛋白质的微小囊泡[1]，直径30～150 nm，呈茶托形或一侧凹陷的半球形结构[2]，主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中[1-3]。外泌体在细胞间信息交流中发挥着重要作用，其携带的物质可作为疾病诊断的分子标志物[4]，也可作为药物载体靶向疾病部位[5]。外泌体在动物体液中分布广泛[6]，血清是从动物体内较为容易获取的体液。从血清中提取得到纯度较高的外泌体用于后期的疾病诊断有着较为重要的意义[7]。目前，关于小鼠血清来源的外泌体的分离方法研究较少。

本实验通过对小鼠来源的血清外泌体的密度梯度离心提取方法以及超高速离心法的提取方法进行比较，讨论这2种方法各自的优缺点，筛选出适合小鼠血清来源外泌体的提取方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

清洁级60日龄昆明系小鼠18只（2019.12.10购入12只，2020.10.10购入6只；均由兰州兽医研究所提供）；30%蔗糖溶液、3%磷钨酸染液；高速离心机（日立CT15RE）、超高速冷冻离心机（日立CP100NX）、透射电子显微镜（日立HT7700，兰州兽医研究所）。

1.2 试验方法

1.2.1 超速离心法 采用超速离心法提取小鼠血清外泌体，具体步骤如图1所示。将6只60日龄昆明系小鼠摘眼球采集小鼠血液，收集血液于离心管中，待血液凝固后，放入离心机中，3 000 r/min，4℃离心5 min，上清液即为血清。将上清液转移到新的离心管中，300 g，4℃离心10 min；……