中晚期骨关节炎患者软骨细胞自噬相关因子表达变化及雷帕霉素对其软骨细胞自噬的影响

王浩，陈群超，殷丽丽

苏州市立医院 苏州市区域性骨质疏松指导中心，江苏苏州215000

在骨关节炎（OA）发展过程中，软骨细胞中受损的细胞器和降解的大分子物质逐渐积累，导致软骨细胞内细胞合成、分解代谢失衡，软骨细胞功能异常、生存能力下降，细胞外基质合成能力下降，从而加速了软骨细胞退变［1-2］。自噬是一种细胞自我降解并回收细胞内组分的过程，在维持细胞环境稳态和提高细胞存活率方面具有重要作用［3］。在哺乳动物细胞自噬中，与ULK1、Beclin1 和LC3 自噬相关的基因分别发挥诱导、调节、执行的作用［4］。哺乳动物中雷帕霉素靶蛋白（mTOR）可负调节自噬过程，在软骨细胞自噬的调节中发挥重要作用［5］。雷帕霉素可以抑制mTOR 信号通路的mTOR 复合物1（mTORC1）表达［6］，其是否可以诱导软骨细胞的自噬水平鲜见报道。2018 年 5 月—2020 年 5 月，本研究比较了中晚期OA 患者软骨细胞自噬相关因子的表达变化，并观察雷帕霉素对中晚期OA 患者软骨细胞自噬的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 药物：雷帕霉素购自北京索莱宝科技有限公司。主要试剂：DMEM 高糖培养基、胎牛血清（FBS）、0.25%胰蛋白酶溶液、Ⅱ型胶原酶均购自美国 Hycolon 公司，TRIzol 试剂、Taq PCR 反应试剂盒均购自中国大连宝生物公司，dNTP Promega、逆转录试剂盒均购自加拿大Fermentas 公司；抗ULK1、抗Beclin1、抗LC3均购自英国Abcam公司。引物：自噬相关基因 ULK1、Beclin1、LC3 及内参 β-actin 引物均由上海生工生物工程有限公司设计合成。

1.2 标本获取及分组 根据Kellgren and Lawrence影像学诊断标准，选择我院截肢手术或膝关节置换术中获得的膝关节正常软骨标本5 例份（正常对照组）、中期OA 软骨标本10 例份（中期OA 组）、晚期OA 软骨标本10 例份（晚期OA 组）。……