曲古霉素A 对人膀胱癌细胞EJ 增殖的影响及其作用机制△

冷俊，周晔，施利琴，张莉

上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院检验科，上海 202150

膀胱癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤。2013 年，中国的膀胱癌新发病例数已达7.44万，且其生物学行为呈多样性。大部分膀胱癌患者于初诊时处于浅表性膀胱癌阶段，但术后容易复发、转移，病死率较高。目前，以多柔比星、丝裂霉素等药物为主的常用术后化疗方案效果一直不甚满意，因此，临床需要寻找一种新型药物治疗途径防止膀胱癌术后复发。近年来，组蛋白去乙酰化酶抑制剂为肿瘤治疗提供了新的思路，而曲古霉素A（trichostatin A，TSA）作为其中的一种代表药物，可抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移。WNT抑制因子 1（WNT inhibitory factor-1，WIF-1）作为 WNT信号通路的重要拮抗物，与肿瘤的发生、发展密切相关。本研究以体外培养的人膀胱癌细胞EJ为模型，观察了不同浓度的TSA对膀胱癌细胞EJ增殖及WIF-1基因表达的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞株与主要试剂

人膀胱癌细胞株EJ购于美国菌种保藏中心，TSA、碘化丙啶、胰蛋白酶均购于Sigma公司，RNA抽提试剂TRizol购于Invitrogen公司，EZ ChIPChromatin Immunoprecipitation Kit购于Upstate公司，Anti-acetyl-Histone H3（Lys9）购于Abcam公司，逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）试剂盒购于宝生物工程（大连）有限公司，RPMI 1640培养液、胎牛血清均购于Gbico公司，Taq Plantinum PCR Master-Mix购于TIANGEN公司，青、链霉素均购于碧云天公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 将膀胱癌细胞株EJ置于含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、0.1 mg/ml链霉素的RPMI 1640培养基中，在37 ℃、5% CO、100%饱和湿度的孵箱内进行培养。视细胞生长情况换液、传代。

1.2.2 四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl terazolium，MTT）比色法 取对数生长期的人膀胱癌细胞EJ接种于96孔培养板中，每孔约含1×10个细胞，置入培养箱，待细胞贴壁后进行实验：培养液中含终浓度为 0.1、0.2、0.4、0.8 和 1.6 μmol/L TSA 和仅加RPMI 1640培养液的空白对照。……