鸡传染性喉气管炎病毒贵州株gD基因的遗传进化分析

赵 超， 张启琴， 陈 静， 尹德晶， 肖 丽， 吴斌凤， 胡 茜， 刘 婷， 郭小江， 程振涛，2*

(1. 贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025； 2. 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室，贵州 贵阳 550025； 3. 贵州省草地技术实验推广站，贵州 贵阳 550025)

鸡传染性喉气管炎(Avian infectious laryngotracheitis，AILT) 是由传染性喉气管炎病毒 (Infectious laryngotracheitis virus，ILTV) 引起鸡的1种急性、高度接触性传染病[1]。我国于20世纪50年代末期首次报道有该病发生，90年代后在我国一些地区呈地方流行性[2]。其感染后主要侵害鸡的上呼吸道，发病率高，传播速度快，给我国的养鸡业造成很大损失。ILTV 属于疱疹病毒科，α-疱疹病毒亚科，禽疱疹病毒Ⅰ 型，是二十面体对称的双链DNA病毒；gD基因是该病毒的主要糖蛋白基因，对于病毒的吸附及侵入是必需的，也是病毒繁殖的必需基因，能够诱导机体产生细胞和体液免疫应答[3]。本试验对在贵州省开阳县某养鸡场分离的ILTV贵州株gD基因进行PCR扩增、克隆、序列及遗传进化分析，以了解该毒株的遗传进化情况，为防控疫苗选择提供依据。

1 材料与方法

1.1 病料采集贵州省开阳县某养鸡场ILTV感染鸡喉头和气管样品4份。

1.2 主要试剂DNA提取试剂盒、DL 2 000 DNA Marker、2×TaqPCR Master Mix、pMD-18T载体试剂、限制性内切酶BamHⅠ、HindⅢ(购自大连宝生物工程有限公司)；质粒提取试剂盒、胶回收试剂盒(购自Omega公司)；大肠杆菌感受态细胞DH5α(贵州大学动物疫病研究所制备并保存)；其他试剂均为国产分析纯。

1.3 主要仪器凝胶成像仪(购自天能科技有限公司)、多功能梯度PCR仪VeritiTM96-Well Thermai(购自美国ABI公司)、DYY-8C型电泳仪器电源(购自北京市六一仪器厂)、QYC-2102C恒温培养摇床(购自上海新苗医疗器械制造有限公司)、恒温金属浴(购自上海蓝貌实验仪器有限公司)。……