截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠cyclin D-E2F1信号通路及转录因子活化的机制研究

方娴 姜雪娇 侯伟欣 房鹏 张秋云

慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)是在引起急性肝损伤诱因的作用下，肝功能相对稳定的慢性肝病患者急速恶化并发生肝衰竭的综合征[1]。该病目前没有特异性治疗手段，临床上多以抗病毒、人工肝支持治疗，疗效不理想，短期病死率为50%～90%[2]。肝移植是目前唯一能提高患者长期生存率的手段，但由于肝源严重不足，故使用受限。ACLF的发病机制被认为可能与肝细胞大量凋亡和肝细胞再生障碍不足有关[3]。相关研究结果显示，ACLF患者肝脏中缺乏有效的肝细胞复制是其死亡率较高的原因之一[4]，ACLF中肝祖细胞(hepatic progenitor cell，HPC)的激活能诱导肝脏进行再生二级反应，从而诱导肝细胞增殖，改善肝脏损伤，避免ACLF进一步恶化[5]。因此恢复肝脏的正常再生能力在急性发作期肝衰竭的治疗中具有广阔的前景。截断逆挽方是由全国名中医钱英教授创制的临床治疗ACLF的有效方剂，本课题组前期研究结果提示：本方能减轻ACLF模型大鼠肝组织炎性损伤、抑制肝细胞过度凋亡，并能预防给药后促进肝细胞代偿性增殖[6-7]。本研究在此基础上观察截断逆挽方对ACLF大鼠肝功能、凝血酶原活动度及肝脏病理的改善情况，考察肝细胞再生过程中的关键基因cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、CDK6及关键蛋白DP1表达量的影响，进一步探讨证核该方通过调节cyclinD-E2F1肝细胞增殖通路相关转录因子治疗ACLF大鼠肝损伤及修复机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选用SPF级Wistar雄性大鼠105只，体重(180±20)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证编号SCXK(京)2016-0006。……