哮喘患者IL-13基因Intron3+1923位点C/T、β2-AR基因R16G单核苷酸多态性及HLA等位基因频率表达对外周血T淋巴细胞亚群和IgE的影响*

常永莉，张莉媛，王惠琴，王冰，陈方园，李天浩(陕西中医药大学第二附属医院呼吸内科，陕西咸阳 712000)

细胞因子可调节细胞增殖、分化，其中白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)基因、β2肾上腺素能受体(β2 adrenergic receptor,β2-AR)基因、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因在哮喘患者发病过程中具有重要意义[1]。IL-13基因Intron3+1923位点C/T多态性对IL-13的生物学活性具有调节作用[2]。Mohamed-Hussein等[3]指出，β2-AR功能低下可能是导致哮喘发病的重要机制。谷亚星等[4]认为，HLA基因在调节机体免疫方面具有重要作用，且对多种呼吸系统疾病具有易感性。因此，对上述基因多态性的研究已成为了哮喘遗传学的研究热点。本研究采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-PFLP)对90例哮喘患者IL-13、β2-AR及HLA基因进行检测，并测定其与T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白E(IgE)之间的关系。

1 资料与方法

1.2仪器与试剂 限制性内切酶NIAⅣ、TaqDNA聚合酶、IgE酶标抗体、Trizol试剂(美国赛默飞世尔科技公司)，抗人CD3+、CD4+、CD8+单克隆抗体及IgG对照(北京同立海源生物科技公司)。Applied biosystems PCR热循环仪(美国赛默飞世尔科技公司)，DNM-9602G酶联仪(北京普朗新技术公司)，DYY-4C稳压稳流定时电泳仪(上海沪粤明科学仪器公司)，BD流式细胞仪(昆山市赛特科学仪器公司)。

1.3方法

1.3.1标本采集及DNA抽提 采集哮喘患者治疗前及健康人对照组体检时的晨起空腹静脉血3 mL，477×g离心10 min。取血浆500 μL，置于-20 ℃保存，用以检测血清IgE水平。其余部分抽提DNA。吸取细胞悬液至1.5 mL Ep管中，4 ℃、251×g离心5 min，弃上清液，按照Trizol试剂说明书操作抽提DNA，采用紫外分光光度计检测DNA样本，取吸光度(A260/280 nm)值在1.8～2.1的样本用于后续试验。样本置-20 ℃保存。

1.3.2引物设计及PCR 根据GenBank收录的IL-13、β2-AR、HLA基因序列，采用Primer Premier 5.0软件设计引物，并由上海生工公司合成特异性引物，引物序列见表1。……