qRT-PCR法用于检测模拟环境表面载体HBV DNA的可行性研究*

陶西萍，来春艳△，赵 娜，魏晨波，薛卫宁，郭晓波

陕西省西安市中心医院：1.医院感染管理科；2.血液病研究所，陕西西安 710003

感染性疾病病原体可以通过呼吸道、接触等途径传播，污染的环境表面是间接接触传播的重要媒介，特别是在传染病流行期间，公共场所、医疗机构环境表面的污染状况及传播风险不容忽视，有文献报道，在手足口病/疱疹性咽峡炎独立接诊候诊区，医院环境肠道病毒污染阳性率为47.50%，环境表面肠道病毒污染有传播的风险，但我国尚无环境表面病毒污染状况检测标准，探索科学、可行的检测方法成为一项重要课题[1]。有学者运用ELISA法检测环境表面乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)来证实环境表面存在HBV污染，但无法判断检测样本是否具有感染能力，对于环境表面的清洁消毒、感染防控指导意义较小[2-3]。实时荧光定量PCR法(qRT-PCR法)目前已广泛用于临床血液样本中多种病毒的检测，但由于无相关技术标准，较少用于环境表面病毒的检测[4]。本研究用HBV载体模拟环境表面，并探索性应用qRT-PCR法检测HBV DNA，以验证qRT-PCR法用于环境表面病毒核酸检测的可行性。

1 材料与方法

1.1试剂与仪器 采样液(天津灏洋华科生物科技有限公司生产，主要成分为氯化钠、氯化钾、葡萄糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、庆大霉素及两性霉素)、生理盐水；4种HBV标准品(浓度分别为5×106、5×105、5×104、5×103IU/mL)；HBV核酸测定试剂盒(荧光PCR法，上海之江生物科技股份有限公司)；Autrax全自动核酸提取站；SLAN-96P型荧光定量PCR仪等。

1.2方法

1.2.1环境表面HBV载体的制备 载体制备：将非光滑的PVC塑料板剪成5 cm×5 cm大小，首先用流动水清洗、2 000 mg/L含氯消毒剂浸泡30 min后清洗、擦拭、晾干后作为试验对象。……