滞育期九香虫卵巢组织蛋白的LC-MS/MS鉴定

郭建军 田莹 檀军 金道超

摘 要：九香虫的越冬滞育是影响其大规模人工繁殖的桎楛，保幼激素可调控九香虫的滞育，并可促进卵巢发育。为探索滞育期九香虫卵巢组织蛋白的组成，本研究提取滞育期与滞育解除期的九香虫卵巢组织蛋白，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行初步分析，液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）对胰酶消化产生的肽段混合物进行分析。结果表明，质谱共检测到448条肽段，唯一肽段为341条，分布于205种蛋白中，分子量集中在10～60 kDa，其中，保幼激素结合蛋白、过氧化氢酶、ATP酶、精氨酸激酶、热休克蛋白及相关同源蛋白的表达可能与九香虫滞育期的越冬抗逆性、调控生长发育、能量代谢及维持滞育有关。

关键词：九香虫;滞育;卵巢;LC-MS/MS;蛋白鉴定

Abstract：The overwintering diapause of Aspongopus chinensis Dallas affected their large-scale artificial reproduction，juvenile hormone could regulate the diapause of of A.chinensis and promote the development of ovarian.In order to explore the composition of the ovarian tissue proteins during the diapause period，this study extracted the ovarian tissue proteins during the diapause and diapause termination period.Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel （SDS-PAGE） was used for electrophoresis analysis，and the peptides digested by trypsin were analyzed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry （LC-MS/MS）.The results showed that mass spectrometry detected a total of 448 peptide，the number of unique peptide was 341，which were distributed in 205 kinds of proteins，and the molecular weight of these proteins ranged from 10 to 60 kDa.The expression of juvenile hormone binding protein，catalase，ATPase，arginine kinase，heat shock protein and related homologous proteins may be related to the resistance to overwintering，growth，development，energy metabolism and maintenance of diapause in A.chinensis.

Keywords：aspongopus chinensis dallas;diapause; ovary; LC-MS/MS;protein identification

九香蟲（Aspongopus chinensis Dallas）是昆虫纲半翅目兜蝽科昆虫[1-2]，也是《本草纲目》收录的传统中药，其具有理气止痛、温中助阳、抗癌、抗菌、抗凝血的功效[3-7]。九香虫血淋巴、水提液、水煎液、甲醇提取物及纯化蛋白等可抑制胃癌及乳腺癌细胞的体外增殖。近年来，随着人工大规模采集及环境污染，野外九香虫产量逐渐减少，九香虫的市场价格逐年攀升，常供不应求。因此，亟需人工养殖以解决野外虫源不足的问题[8]。

九香虫为不完全变态昆虫，有卵、若虫和成虫3个虫态，其中，卵历期8～10 d，一至五龄若虫共历期80～101 d，成虫寿命约为320～350 d，滞育期高达约210 d，九香虫的越冬滞育现象严重制约了其大规模人工繁殖[9-11]。滞育是一种复杂的生理过程，昆虫在滞育期，其体内的蛋白、多糖、脂类等代谢会发生相应的变化，降低新陈代谢速率，以度过不良环境，保留种群[12]。……