猪圆环病毒3型衣壳蛋白的原核表达和鉴定

李潇南，柳迦鹏，胡 蝶，石玉佩，高 雅，周双海

(北京农学院 动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室，北京 102206)

猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)是一种很小的DNA病毒，猪圆环病毒3型(PCV3)则是新近发现的又一种PCV，能够引起猪皮炎与肾病综合征(porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS)，并可能引起母猪繁殖障碍[1-2]，对养猪业发展造成了一定经济损失。目前PCV3在多个国家均有报道流行[3-4]，中国也在广东、广西、河北、北京等地发现PCV3的存在[5-7]，表明PCV3已在全球比较广泛存在，是一种需要注意防控的新发传染病病原。

PCV3全基因组大小为2 000 nt，其基因组构成与猪圆环病毒2型(PCV2)相似，都被推测存在11个开放阅读框(open reading frame，ORF)，都是由ORF2编码病毒衣壳蛋白(Cap)[1, 8]，这是病毒唯一的结构蛋白，但2种PCV的Cap氨基酸同源性不足50%。目前，检测PCV3主要是通过PCR方法，尚缺乏商品化的免疫学检测试剂。因此，本研究旨在利用原核表达系统表达与鉴定PCV3-Cap融合蛋白，为PCV3的免疫学检测方法建立打下前期基础。

1 材料和方法

1.1 菌株、质粒和主要试剂

PCV3全基因组质粒pUC-PCV3、小鼠抗PCV3-Cap血清与原核表达载体pET-32a由北京农学院动物科学技术学院动物疫病研究室制备或保存；Premix TaqTM为TaKaRa公司产品；质粒小提试剂盒和琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒为OMEGA公司产品；大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)和His标签包涵体蛋白纯化试剂盒为北京康为世纪生物科技有限公司产品；限制性核酸内切酶EcoRⅠ、NotⅠ和T4连接酶为Thermo公司产品。

1.2 PCV3-Cap基因片段扩增

用Primer5.0软件设计1对引物，上游引物为5′-CCGGAATTCAACGTCATATCCGTTGGA-3′，下游引物为5′-ATTGCGGCCGCTTAGAGAACGGACTTGTA-5′，扩增产物大小为507 bp。以pUC-PCV3质粒为DNA模板，上、下游引物各25 pmol来建立50 μL的PCR体系。……