僵蚕碱溶性蛋白质的提取工艺优化及指纹图谱分析

朱锐灵 黄佳滢 刘莹

摘要：建立稀碱法提取僵蚕蛋白质的最佳工艺，并对其进行相应SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）指纹图谱分析。单因素考察缓冲液pH值、液料比、提取时间和提取温度对僵蚕碱溶性蛋白质提取率的影响，随后以Box-Behnken組合设计响应面优化，对试验结果进行回归拟合分析，获得上述因素对碱溶性蛋白质提取率的量化关系，确定最佳提取条件，并对提取的碱溶性蛋白质进行SDS-PAGE指纹图谱分析。结果表明最佳提取工艺条件为：Tris-HCl（三羟甲基氨基甲烷盐酸盐）缓冲液pH值8.0、液料比58 mL ∶ 1 g，提取温度为40 ℃，提取时间为 205 min，此时碱溶性蛋白质提取率可达2.29%。SDS-PAGE指纹图谱结果表明僵蚕碱溶性蛋白质含有29.85、27.28 ku 2条迁移率相近的高丰度特征性条带，分别占总蛋白量的36.37%、32.65%，同时还有78.8、69 ku较高丰度特征性条带，该指纹图谱具有种属特异性。本研究建立了僵蚕碱溶性蛋白质的最佳提取工艺条件，所得SDS-PAGE指纹图谱可为僵蚕药材的分子鉴定提供参考依据。

关键词：僵蚕;碱溶性蛋白质;响应面;提取工艺;指纹图谱

僵蚕（Bombyx Batryticatus）为蚕蛾科昆虫家蚕（Bombyx mori L.）4～5龄的幼虫感染（或人工接种）白僵菌[Beauveria bassiana （Bals.） Vuillant]而致死的干燥体，为我国常用的大宗动物类中药材[1]。因其息风止痉、祛风止痛、化痰散结的功效，僵蚕常用于抽动障碍、支气管哮喘、顽固性蛋白尿及多种儿科疾病的临床治疗，且疗效甚佳[2-3]。由于僵蚕售价较高，市场常见增质量僵蚕、绿僵蚕、黄僵蚕、鼓炒僵蚕等伪品出售，严重影响临床用药的安全性与有效性[4]。……