荧光蛋白mNeonGreen,mKOk作为FRET传能对在研究植物蛋白质互作中的应用分析

王亚琴 李宗迪 李晨羊 李云琴 胡涛 谢礼 周雪平

关键词蛋白质互作;荧光共振能量转移;mNeonGreen;mKOk

荧光共振能量转移技术（fluorescence reso-nance energy transfer，FRET）是指两个相互靠近的荧光发色基团中，一个分子吸收一定频率的光子被激发到更高的电子能態的同时，通过偶极子相互作用，将能量向另一分子转移（即发生能量共振转移）的现象。这种现象的发生有两个前提条件：一是两个荧光发光基团中一个荧光基团（供体分子）的发射光波长需与另一个荧光基团（受体分子）的激发光波长存在重叠区域;二是供体分子和受体分子之间的距离必须在1～10nm之间。由于荧光共振能量转移现象需要在这两个较为苛刻的条件下才能发生，且对供体和受体间的距离和空间取向高度敏感，因而可以作为检测蛋白质之间直接相互作用的有效工具。

青色荧光蛋白（cyan fluorescent protein，CFP）与黄色荧光蛋白（yellow fluorescent protein，YFP）是目前蛋白质相互作用研究中应用最广泛的FRET对，但CFP/YFP对存在一定的不足，如CFP和YFP会发生快速、多速率、可逆的光漂白，YFP可在一定条件下光转化为青色荧光，CFP可以被YFP的激发光波长激发出荧光等原因造成CFP/YFP对背景干扰较大。此外，许多报道表明基于CFP和YFP的FRET，当生物化学反应微弱或比较短暂时，会对FRET检测效率产生一定的挑战。因此，找到一对低背景干扰且能量转移效率高的荧光蛋白对，对于FRET的检测至关重要。

mNeonGreen是一种来源于文昌鱼Branchios-toma lanceolatum的新型绿色荧光蛋白，最大激发光和发射光的波长分别为504、517 nm，mKOk是一种来源于石珊瑚Verrillofungia concinna的新型橙色荧光蛋白，最大激发光波长和发射光波长分别为551、563 nm，研究发现，mNeonGreen和mKOk荧光蛋白相较于传统的绿色和橙色荧光蛋白具有更强的荧光强度。……