大丽轮枝菌及激素处理后棉花酵母双杂交文库的构建

许艳 李冉 宋健 王丹 周雷 李俊娇 张丹丹 陈捷胤 戴小枫 杨星勇

关键词大丽轮枝菌;植物激素;酵母双杂交;cDNA文库;互作蛋白

黄萎病是由大丽轮枝菌Verticillium dahliae引起的世界性真菌病害，每年造成棉花、马铃薯、蔬菜等农作物损失数十亿美元，严重威胁农业生产安全。感染黄萎病的植物通常表现出叶片萎蔫、黄化、卷曲或坏死症状，维管束变褐，并随着病程进展最终枯萎死亡。

大丽轮枝菌分泌大量具有毒力的胞外蛋白是成功侵染寄主的重要策略之一，如其分泌的细胞壁降解酶类在侵染寄主过程中通常参与降解细胞壁的作用，表现为毒力功能。另外一类分泌蛋白则参与了病原与寄主互作过程，如大丽轮枝菌的无毒因子Avel能够被番茄的抗性蛋白Vel识别而诱导寄主免疫反应;大丽轮枝菌中小分子量的富含半胱氨酸蛋白VdSCP41能与寄主植物的转录因子CBP60g互作而激发免疫反应。此外，通过在模式植物烟草中瞬时表达大丽轮枝菌分泌的胞外蛋白，还筛选出了多个参与寄主互作的毒力因子，如糖苷水解酶VdEG1和VdEG3、角质酶VdCUTll、小分子量富含半胱氨酸蛋白VdSCP7、坏死和乙烯诱导蛋白NLPs。目前，多个参与病原与寄主互作的效应蛋白已经被鉴定并确定了其在侵染过程中的毒力功能，但其是如何识别寄主或被寄主识别并发挥作用的机制仍不清楚。

酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system，Y2H）是研究蛋白相互作用的常用方法之一，最早在1989年由Fields和Song提出，其原理是利用真核生物转录因子的DNA结合结构……