G 蛋白耦联胆汁酸受体激动剂INT777通过激活AMPK 信号通路抑制施万细胞成髓鞘过程*

关晋东，丁 杰，刘晓宇，孙 诚*

(南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室/神经再生协同创新中心，南通 226001)

外周神经系统(peripheral nervous system,PNS)在机体内分布广泛且起到介导靶器官与中枢神经系统信号传递的重要作用。轴突的髓鞘化是神经系统传递神经冲动信号，执行其功能的基础保障，髓鞘化过程异常会导致多种疾病的发生[1]。外周神经中执行髓鞘形成这一重要任务由施万细胞完成。外周神经髓鞘形成过程是一个严谨的、由多种转录因子参与调控的复杂生理过程[2]。这些转录因子包括SRY 盒转录因子10(SRY-box transcription factor 10,Sox10)，八聚体结合转录因子6(octamer-binding transcription factor-6,Oct6)，髓鞘早期生长因子20(early growth response-2,Krox20)，髓磷脂蛋白(myelin protein zero,MPZ)等。

G 蛋白耦联胆汁酸受体(G-protein-coupled bile acid receptor 1,GPBAR1，同时也被称为TGR5)，在多种组织和器官中有不同水平的表达，功能多样[3]。有报道[4]指出TGR5 可通过激活环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophsphate,cAMP)-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)信号通路调节恶性肿瘤的发生发展过程。6α-乙基-23(S)-甲基胆酸[6 alpha-ethyl-23(S)-methylcholic acid,INT777]是TGR5 特异性激动剂，具有毒性低、效价高等特点。研究[5]发现施万细胞与背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)神经元共培养模型中，二丁酰环腺苷酸(dibutyryl cyclic adenoslne phosphate,dbcAMP)的添加能促进细胞分化，加速髓鞘化进程。本研究旨在通过激动剂INT777 处理原代施万细胞，明确其对外周神经髓鞘化进程的作用，并初步探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 出生1 d 的SD 大鼠红皮30 只购于南通大学实验动物中心。

1.2 实验试剂 Forsklin,HRG(human Heregulin-1)、dbcAMP、Trizol、ComC(Compound C)均购于MERCK公司，DMEM 高糖培养基、胰蛋白酶、胎牛血清均购于Gibco 公司，SuperScript IV/RT-PCR Kit、Applied Biosystem SYBR Green Mix 购于Thermo Fisher 公司，SDS-PAGE 凝胶购于碧云天生物公司，细胞裂解液RIPA，5×SDS-PAGE 电泳缓冲液、5×SDS-PAGE Loading buffer、10×Trans buffer、10×三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液(Tris buffered saline tween,TBST)均在实验室自配。……