非洲猪瘟病毒LAMP可视化快速检测方法的建立与应用

王林，吴迪，高晓龙，张玮，张启龙，栗云鹏，韦海涛，周德刚，刘晓冬，宋彦军

(北京市动物疫病预防控制中心，北京 102629)

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的猪以呼吸障碍、神经症状和全身出血为主要特征的急性、热性、高度传染性疫病。家猪感染后的临床表现为高热、呕吐、腹泻或便秘，最明显的剖检症状为脾脏肿大，致死率可高达100%[1]。1921年在肯尼亚首次记载了非洲猪瘟的暴发，之后该病主要流行于非洲各国，并相继传入西欧、南美和东欧等多个国家，造成了重大的经济损失和社会危害[2]。具有诊断学意义的病毒基因主要有B646L，大小为1 938 bp，编码结构蛋白P72(VP73)，位于中心保守区[3]。在不同毒株间核苷酸同源性达95.5%～100%，氨基酸同源性达97.8%～100%[4]。B646L是公认的分子检测技术引物设计的理想靶标。2018年8月3日辽宁省沈阳市首次暴发非洲猪瘟疫情，10个月内席卷全国31省市，累计报告疫情152起，给我国养猪业造成重大经济损失[5]。目前尚无有效疫苗进行防控，因此在临床上需要一种能够快速检测或筛查ASFV毒株的检测方法。

环介导等温扩增(LAMP)方法是由日本学者Notomi在2000年发明的一种适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术[6]，该方法利用设计的4条特异性引物和具有链置换特性的BstDNA聚合酶，在30～60 min内对目的片段进行扩增[7]，是一种简便、快速、精确、廉价的基因扩增方法[8]。LAMP方法适合现场、基层快速检测，本研究建立的基于钙黄绿素可视化LAMP检测ASFV的方法，经过一系列优化试验，对特异性、灵敏性、应用仪器设备与临床样品检测进行摸索，建立了一种ASFV LAMP目视法检测方法，以期应用于ASFV现场快速诊断。……