双硫仑联合铜通过调控视神经萎缩蛋白1诱导舌癌细胞凋亡

金 杯，戴盼盼，孙 旺，顾卫燕，林海升，施更生

舌癌是常见的口腔恶性肿瘤，在所有口腔癌患者中的构成比为 32.5%～50.6%，并且手术治疗难度大，对放化疗特异性不佳，综合疗效不理想[1]。因此，寻找新的治疗方法具有重要意义。双硫仑(disulfiram，DSF)多年来被用于治疗慢性酒精中毒，近年来研究发现其与临床相关浓度的铜结合对多种恶性肿瘤显示出抗癌作用，但是与舌癌相关的研究甚少，具体机制尚不明确。视神经萎缩蛋白1(optic atrophy 1，OPA1)调控线粒体的网络融合，与线粒体功能密切相关，并在细胞凋亡中发挥了重要的作用[2]。此外，研究发现OPA1与肿瘤的恶性变有关[3]。因此，本研究探讨DSF-Cu对舌癌细胞Cal-27凋亡的影响以及OPA1在其中的作用，为DSF-Cu在临床上的应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

舌鳞状细胞癌细胞Cal-27(上海中乔新舟生物科技有限公司，批号ZQ0606)；MEM细胞完全培养基(上海中乔新舟生物科技有限公司，批号ZQ-301)；胰蛋白酶(美国Gibco公司，批号25200-056)；DSF(美国Sigma公司，批号86720)；氯化铜(美国Sigma公司，批号C3279)；(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)(美国Sigma公司，批号M2128)；二甲基亚砜(DMSO)(美国Sigma公司，批号D5879)；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(美国Sigma公司，批号APOBRDU)；β-actin一抗(美国Sigma公司，批号A1978)；ATP检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司，S0026)；OPA1(BD Biosciences，批号612606)。CO2恒温培养箱(Thermo，美国)；酶标仪(Bio-TEK，美国)；流式细胞仪(Becton，美国)；电泳仪(BIO-RAD，美国)；曝光仪(BIO-RAD，美国)。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂配制 DSF经DMSO溶解并稀释成2 mmol/L，分装后-20 ℃保存；氯化铜用无菌PBS溶解配制成50 mmol/L后经孔径0.22 μm无菌过滤器过滤后4 ℃保存，临用前用培养基将上述溶液稀释成所需工作液浓度。……