siRNA靶向沉默人多梳基因2对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响

吴梅，杨丽，再努拉·艾未肉拉，唐亮

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是常见的头颈部恶性肿瘤，东南亚和我国华南地区是高发区。鼻咽癌对放化疗敏感，肿瘤局部和淋巴结复发病人预后差，与肿瘤细胞的耐药和恶性增殖密切相关，探索相关的鼻咽癌增殖相关的驱动基因及信号通路，将有利于推进鼻咽癌的分子靶向治疗。

人多梳基因（human polycomb，HPC）是多梳基因家族（The Polycomb Group of Protein，PcG）的成员，HPC有三个亚型，HPC1，HPC2，HPC3。HPC2又名染色框同源物4（chromobox homolog 4，CBX4），该基因定位于17q25.3，在不同肿瘤细胞中mRNA表达丰度差别很大，如在骨肉瘤（U2-OS）和结肠腺癌（SW480）含量高，在小细胞癌中的表达量却很低。本课题组前期研究发现，鼻咽癌组织中HPC2高表达与病人不良预后密切相关，但其在鼻咽癌发生发展中的作用尚不清楚。因此，本研究旨在探讨HPC2在鼻咽癌细胞增殖中的作用及对细胞周期的影响。

1 材料和方法

1.1 细胞和实验试剂

UCU-3；#2-siRNA序 列（正向链）5’-AGUAC‐GAGCUCAACAGCAA-3’；（反 向 链）5-UUGCU‐GUUGAGCUCGUACU-3；scrambled为无干扰功能的对照序列。Nexcelom全自动计数仪进行细胞计数。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养和转染 复苏5-8F细胞，使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液，在5%二氧化碳、37℃恒温培养箱培养。转染前1 d，胰酶消化对数生长期的细胞，接种细胞于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基的6孔板，使细胞在转染日能够达到70%融合度。采用细胞瞬时转染（转染试剂RNAi max），实验分为对照组（scrambled）（转染无功能对照siRNA）和两个si-RNA组（转染靶向HPC2的特异性siRNA）。……