葛根素联合γ突触核蛋白-微小RNA对肺癌H1299细胞增殖凋亡的影响

邹华兰，曾健梅，冷兴强，钟晶宇

肺癌是对人类身体健康威胁最大的恶性肿瘤之一，尽管近几十年来肺癌的治疗技术有所进步，但病人5年生存率仍然不高，如何有效提高肺癌病人的生存率一直是研究的热点。葛根素是中药葛根的有效成分之一，除了具有抗炎、抗氧化和降糖等药理活性外，还在包括肺癌在内的多种肿瘤中表现出较好的抗肿瘤活性。近年来有研究指出，葛根素联合γ突触核蛋白（synuclein gamma，SNCG）-siRNA可协同抑制膀胱癌细胞生长。SNCG是突触核蛋白（synucleins）家族成员，参与神经递质的释放，与帕金森病等神经退行性疾病密切相关；此外，SNCG还在乳腺癌、子宫内膜癌和结直肠癌等肿瘤组织中异常表达，可影响细胞生物学功能，参与肿瘤的发生发展。有研究报道，SNCG在肺癌组织中高表达，可通过激活AKT促进癌细胞增殖。本研究自2019年2－6月研究葛根素联合SNCG-siRNA抗肺癌的可行性，并探讨其可能的分子机制，以期为肺癌的治疗提供新线索。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 肿瘤增殖抗原（Ki67）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白和Bcl-2相关X蛋白（Bax）抗体（Santa Cruz），SNCG、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体（Ab‐cam）。脂质体2000和Trizol试剂（Invitrogen）。二氧化碳恒温培养箱（Thorma），流式细胞仪（Becton Dickinson）公司，酶标仪（Bio-Rad）。

1.2 细胞培养 H1299细胞采用添加有10%胎牛血清和100 U/mL青链霉双抗的RPMI1640培养基在5%二氧化碳、饱和湿度和37℃恒温培养箱中常规培养。每天观察，待细胞贴壁80%时，以0.25%胰蛋白酶消化2 min，按照1∶2～1∶3比例传代。取生长状况良好的第3代对数生长期细胞进行实验。

1.3 葛根素浓度筛选实验 采用MTT法检测。……