基于宿主诱导的基因沉默技术创制抗拟轮枝镰孢玉米自交系

赫可伟，陈甲法，周子键，吴建宇,

基于宿主诱导的基因沉默技术创制抗拟轮枝镰孢玉米自交系

赫可伟1，陈甲法2，周子键2，吴建宇

1河南农业大学农学院，郑州 450002；2河南农业大学生命科学学院，郑州 450002

【】拟轮枝镰孢（）是一种主要的病原真菌，侵染玉米可以导致穗粒腐病、茎腐病、苗期根腐病及引起种子腐烂。由拟轮枝镰孢引起的病害不仅影响玉米的产量和品质，而且其病原菌代谢过程中产生的伏马菌素等多种真菌毒素严重威胁了人畜安全。通过宿主诱导的基因沉默（host-induced gene silencing，HIGS）技术创制抗拟轮枝镰孢的玉米种质，为玉米抗病育种提供新的优异抗源。通过同源克隆方法克隆可能与拟轮枝镰孢生长发育相关的关键基因，并通过体外转录获得相应的dsRNA片段；将不同基因的dsRNA与拟轮枝镰孢的分生孢子悬浮液预混后，用于后续的体外RNA沉默试验；对感病玉米自交系西502的种子进行消毒与接种，在培养皿中28℃避光培养48 h，调查种子的发病程度；在混有dsRNA的孢子悬浮液中加入葡萄糖，25℃培养24 h后，在显微镜下观察孢子萌发与菌丝生长情况；将三叶期的西502幼苗转移至预混dsRNA的孢子悬浮液中进行培养，7 d后观察苗期根腐病发病状况；通过种子鉴定与苗期鉴定体系，逐步筛选具有显著抑制效果的沉默靶标基因；合成筛选出的重点靶标基因片段，构建沉默载体并转化感病玉米自交系西502；对转基因株系的种子接种鉴定，验证转化玉米株系的抗性；提取接种后转基因种子的总RNA，对拟轮枝镰孢的靶标基因进行荧光定量分析，确定HIGS株系的沉默效果。……